体外肝细胞培养用于西药肝毒性研究

论文摘要

本文以体外培养的原代肝细胞为模型研究药物肝毒性,并在此基础上进行保肝药物筛选。对比传统的肝细胞单层贴壁培养,本文采用了拟组织化的凝胶包埋培养方式,探究其在药物肝毒性和保肝药物研究中的应用可行性。本文分以下三部分: 1.采用凝胶包埋大鼠肝细胞研究5种不同机理的药物,即硫唑嘌呤、无味红霉素、红霉素、他克林和氯氮平的肝毒性作用,并与单层贴壁培养的结果比较。结果发现,1-5μM硫唑嘌呤、5-10μM无味红霉素、0.05-0.1mM他克林和36.7-73.6μM氯氮平均导致了凝胶包埋培养肝细胞的死亡,并伴随着肝细胞胞内谷胱甘肽（GSH）的显著降低。凝胶包埋培养的大鼠肝细胞对硫唑嘌呤的毒性反应不如单层贴壁培养敏感,而对无味红霉素和他克林的毒性比单层贴壁培养更敏感,推测这两种培养模型对不同毒性机理的药物毒性反应有明显差异。由于凝胶包埋培养中药物代谢酶活比单层贴壁培养高1.5-2倍,因此可能产生了更多的毒性代谢中间产物,所以凝胶包埋培养比单层贴壁培养对药物毒性敏感性高。而低浓度硫唑嘌呤在凝胶包埋体系中的传质可能是凝胶包埋大鼠肝细胞对硫唑嘌呤毒性不敏感的原因。5种药物的体外实验结果表明,凝胶包埋模型可以作为药物毒性研究的模型,并在药物毒性的中对药物毒性的机理有所提示。 2.以硫唑嘌呤损伤的鼠肝细胞作为肝毒性模型,研究凝胶包埋培养用于保肝药物筛选的可行性。GSH和N—乙酰半胱氨酸（NAC）对硫唑嘌呤作用48h的大鼠原代肝细胞没有保护作用,胞内GSH没有被增加。在两个模型中,5g/L甘草和0.15g/L甘草酸均能保持肝细胞内的GSH水平,减小硫唑嘌呤造成的肝细胞损伤,并且,将凝胶包埋中的肝细胞延长培养达96h,中药保肝药物的保护作用更加显著。因此,凝胶包埋培养模型可以用于保肝药物的筛选。 3.以人肝细胞模型研究硫唑嘌呤（1-50μM）体外肝毒性的结果与大鼠肝细

论文目录

• 1.文献综述
• 1.1.序言
• 1.2.原代肝细胞的体外培养方式
• 1.2.1.单层贴壁培养法
• 1.2.2.中空纤维丝凝胶包埋培养法
• 1.3.药物肝毒性机理
• 1.3.1.硫唑嘌呤肝毒性
• 1.3.2.红霉素与无味红霉素肝毒性
• 1.3.3.氯氮平的肝毒性机理
• 1.3.4.他克林肝毒性机理
• 1.4.保护肝细胞的药物
• 1.4.1.N—乙酰半胱氨酸（NAC）和GSH的保肝作用
• 1.4.2.甘草和甘草酸的保肝作用
• 1.5.人肝细胞应用于药物肝毒性研究
• 1.6.实验设计
• 2.材料与方法
• 2.1.试剂与器材
• 2.1.1.主要试剂
• 2.1.2.主要器材
• 2.2.主要溶液配置
• 2.2.1.细胞收获和培养所用溶液
• 2.2.2.中药甘草液配置
• 2.3.原代肝细胞收获及培养方法
• 2.3.1.大鼠原代肝细胞收获和培养
• 2.3.2.人原代肝细胞收获及培养方法
• 2.4.分析方法
• 2.4.1.MTT法测定细胞活率
• 2.4.2.胞内GSH测定
• 3.凝胶包埋培养大鼠肝细胞用于药物肝毒性的研究
• 3.1.硫唑嘌呤的肝毒性
• 3.2.氯氮平肝毒性
• 3.3.红霉素和无味红霉素肝毒性
• 3.4.他克林肝毒性
• 3.5.讨论
• 4.保肝药物对硫唑嘌呤肝毒性模型的作用
• 4.1.GSH，NAC对硫唑嘌呤肝毒性的作用
• 4.1.1.结果
• 4.1.2.讨论
• 4.2.甘草、甘草酸对硫唑嘌呤肝毒性的解毒作用
• 4.2.1.甘草与甘草酸的浓度确定
• 4.2.2.甘草、甘草酸对硫唑嘌呤大鼠肝细胞损伤模型的保护作用
• 4.3.本章小结
• 5.硫唑嘌呤对人肝细胞的实验
• 5.1.硫唑嘌呤对人肝细胞作用
• 5.2.甘草酸对硫唑嘌呤造成的人肝损伤模型的保护作用
• 5.3.讨论
• 6.结论与展望
• 6.1.结论：
• 6.1.1.肝毒性药物的毒性作用表现
• 6.1.2.凝胶包埋培养模型用于保肝药物筛选
• 6.1.3.人肝细胞与鼠肝细胞的种属差异
• 6.2.展望
• 7.致谢
• 8.硕士期间的成果
• 参考文献