肌肉注射sRAGE基因对高脂餐大鼠脂质代谢、慢性炎症状态及重要器官的作用

论文摘要

背景及目的:高脂餐饮食促使动脉粥样硬化、血脂异常、胰岛素抵抗等发病,现代生活习惯使之呈流行趋势,近年研究表明慢性炎症和胰岛素抵抗相辅相成。现代饮食以高脂、高热量为特征,高温烹制的食物富含晚期糖基化终末产物（AGE）,AGE与与其受体（RAGE）结合,通过NADPH及NF-κB通路,激活巨噬细胞,可导致氧化应激,引起多种促炎因子产生,一次摄入虽可使循环中AGE升高,使机体短时间内产生氧化应激状态,炎症因子水平升高,但停止摄入后机体AGE水平逐渐下降,氧化应激逐渐消退,但如果长期大剂量摄入,则会超出机体的代偿能力,表现为慢性炎症状态。减少食物中的AGE、阻断AGE与RAGE结合可降低机体慢性炎症状态,使db/db大鼠胰岛素抵抗减轻,NOD小鼠和高脂餐C57/B6小鼠糖尿病发生减少,糖尿病慢性并发症（动脉粥样硬化、微血管并发症）减轻。新近研究发现体内存在一种缺失细胞跨膜段及细胞内段的RAGE（又称为sRAGE）具有与AGE结合的能力,限制了AGE与细胞膜上完整的RAGE结合的能力,阻断AGE所导致的细胞氧化应激,减轻机体慢性免疫反应状态。本研究的目的是通过肌肉注射sRAGE基因,观察sRAGE对高脂餐大鼠机体氧化应激状态、脂质代谢、胰岛素抵抗及主动脉内膜、肝脏、肾脏的改变的影响。探讨肌肉注射sRAGE基因防治高脂餐大鼠代谢紊乱及重要器官损伤的作用。方法:1.动物实验:取SD大鼠28只（体重150～160g,6周龄）,随机分为3组:高脂餐治疗组、高脂餐对照组和普通餐对照组。高脂餐大鼠先以高脂餐喂养8周,第9周10只在双侧后腿肌内各注射pLNCX2-sRAGE 300μg（高脂餐治疗组）,10只注射pLNCX2质粒300μg/侧（高脂餐对照组）:分别于第12周、第15周重复注射一次,第17周处死。8只同期普通饲料喂养的大鼠（普通餐对照组）在第17周处死。骨骼肌注射pLNCX2-sRAGE和pLNCX2质粒方法:4%水合氯醛腹腔麻醉大鼠,暴露双侧后腿肌肉,各注射质粒300μg,以电极相距20mm给予方波电脉冲（电压200V/cm,波宽40CM,脉冲次数9,频率1HZ）刺激,以增加基因转移效率。2.三组大鼠分别于每次注射后的1、2、3周断尾取血测定SOD、MDA值。第17周处死前测空腹血糖和体重,处死后立即取心脏血、主动脉、肝脏和肾脏,进行血清胰岛素、甘油三脂、总胆固醇、TNF-α、超敏CRP、SOD、MDA测定,肾脏和主动脉病理HE染色,应用免疫组织化学染色观察经不同措施处理的大鼠的肾脏TGF-β1、肝脏NF-κB的表达。结果:1.高脂餐对照组体重、血糖、血清胰岛素、甘油三脂、总胆固醇、超敏CRP、TNF-α较普通餐对照组明显升高,与高脂餐对照组相比高脂餐治疗组除体重和超敏CRP轻度下降无统计学差异、甘油三脂显著升高外,其余各指标下降有统计学差异。2.高脂餐治疗组大鼠注射基因后SOD水平逐渐上升,到第1次注射后3周与高脂餐对照组呈现统计学差异（P<0.05）,高脂餐治疗组大鼠注射基因后血MDA水平开始下降,1次注射后2周与高脂餐对照组有统计学差异（P<0.05）,在1次注射后3周有所升高;重复注射SOD继续升高,至接近普通餐对照组不再升高,MDA再次下降。3. sRAGE对重要器官作用情况:普通餐对照组和高脂餐治疗组均未见动脉粥样硬化,但高脂餐对照组动脉内膜不完整,内皮坏死脱落,局部内膜略增厚,有动脉粥样硬化早期损伤的表现;高脂餐对照组肾小球系膜细胞和细胞外基质增多,TGF-β1呈现高表达,而高脂餐治疗组以上变化则较轻微,普通餐对照组皮质部肾小体和肾小管结构完好,TGF-β1低水平表达,TGF-β1三组间差异显著（P<0.01）;高脂餐对照组肝脏NF-κB表达增加,普通餐对照组呈低水平表达,高脂餐治疗组介于两者之间,三组间差异显著（P<0.01）。结论:1.高脂饮食使大鼠体内氧化应激水平升高,抗氧化能力减弱,骨骼肌注射sRAGE基因可以降低高脂餐大鼠的氧化应激水平,抗氧化能力增强。2.高脂餐可引起胰岛素抵抗,胆固醇水平升高;出现动脉粥样硬化、肾小球硬化的早期表现,骨骼肌注射sRAGE可一定程度地减轻此种改变。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 附图
• （八） 结论
• （九） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢