解毒活血颗粒药物血清对ASO患者血管平滑肌细胞表型变化的影响

论文摘要

目的:通过解毒活血颗粒药物血清作用于动脉硬化性闭塞症（ASO）患者动脉壁中血管平滑肌细胞（VSMC）后,细胞的表型变化,研究解毒活血法治疗ASO的作用机制,从细胞水平证实中药解毒活血法治疗本病的临床效果,进一步指导临床治疗。同时对ASO的病因病机以及生理病理机制从细胞水平上进行探讨。 方法:首先通过用家兔进行ASO造模后解毒活血颗粒水溶液灌胃,在血液药物浓度达最高时,动物心脏取血,离心后收集药物血清,冰箱冻存备用。同时收集临床确诊的ASO患者的病变动脉,提取VSMC并以合适密度接种培养、传代。将传代培养的第6代VSMC接种于已经准备好的96孔板并分为四组:空白对照组、中药治疗组、肝素对照组、中西医结合治疗组。在应用药物血清培养时,观察并记录药物血清作用前后细胞形态变化,并作免疫细胞化学检测VSMC中α-SM-actin和PDGF-A的表达变化,最后进行对比及数据处理。 结果:培养VSMC倒置显微镜观察VSMC形态并经α-SM-actin免疫细胞化学染色呈强阳性鉴定为VSMC。第6代细胞作免疫细胞化学检测结果显示:空白对照组加入家兔高脂血清后随时间的延长（24h→36h→72h）,α-SM-actin与PDGF-A表达无明显差别（P>0.05）,中药治疗组、肝素对照组、中西医结合治疗组加入药物血清后随着时间的延长（24h→36h→72h）α-SM-actin表达增强,而PDGF-A表达减弱。药物作用24h、48h、72h中西医结合治疗组、中药治疗组和肝素对照组与空白对照组比较均有差别（P<0.05）,药物作用24h、48h、72h中西医结合治疗组与中药治疗组和肝素对照组比较均有差别（P<0.05）,药物作用24h、48h、72h中药治疗组与肝素对照组比较均无显著性差别（P>0.05）。 结论:解毒活血颗粒药物血清与肝素作用24、48、72h随着时间的延长VSMC均已有向收缩表型转换的趋势,证明解毒活血颗粒药物血清与肝素均对VSMC表型有逆转作用并与时间呈正相关。并且解毒活血颗粒与肝素结合用药明显优于单纯解毒活血颗粒或肝素用药效果。进一步证实了解毒活血颗粒与肝素的临床疗效,从细胞水平上对ASO的病因病机以及生理病理机制进行探讨。

论文目录

• 引言
• 实验研究
• 1 实验材料
• 1.1 造模家兔饲料
• 1.2 实验对象
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器器械
• 1.5 常用试剂的配制
• 2 实验方法
• 2.1 AS家兔模型的制作
• 2.2 解毒活血颗粒药物血清的获得
• 2.3 平滑肌细胞培养
• 2.4 标本处理
• 2.5 HE染色
• 2.6 免疫组织化学
• 2.7 免疫细胞化学
• 2.8 免疫组化结果测定
• 2.9 统计方法
• 3 实验结果
• 3.1 倒置显微镜观察VSMC生长情况
• 3.2 细胞鉴定结果
• 3.3 组织HE染色结果
• 3.4 免疫组织化学结果
• 3.5 药物血清作用后免疫细胞化学结果
• 4 讨论
• 4.1 平滑肌细胞的培养与合成表型平滑肌细胞模型的建立
• 4.2 α-SM-actin在VSMC中的表达
• 4.3 PDGF-A在VSMC中的表达
• 4.4 解毒活血颗粒组方分析
• 结语
• 参考文献
• 附录1 实验图片
• 附录2 综述
• 致谢