论文摘要
研究背景和目的:高迁移率族蛋白B1（high mobility group box-1,HMGB1）曾称为HMG1,是30多年前发现的非组蛋白核蛋白,因其在凝胶电泳中泳动速度快而得名[1]。在细胞核内,HMGB1作为核功能调节性辅助因子,参与基因转录、DNA复制、修复及V-（D）-J重排等重大生命活动调控过程[2]。在细胞膜表面,HMGB1作为生长因子,与晚期糖基化终末产物受体（receptor for advanced glycation end-products, RAGE）结合介导神经轴突生长,与机体中枢神经系统的发育、成熟有关[3]。在胞外,HMGB1作为细胞因子,具有多种生物学与病理学作用:介导单核/巨噬细胞[4]、中性粒细胞[5]、内皮细胞[6]释放多种炎症因子如TNF、IL-1α、IL-1β等,与多种急慢性炎症的发生发展有关;作为平滑肌细胞的强趋化剂,HMGB1可促使平滑肌细胞向内膜转移,在动脉粥样硬化和动脉损伤后再狭窄的病理过程中发挥作用[7];HMGB1可抑制肿瘤细胞凋亡[8]、促进纤维蛋白酶原活化而有利于肿瘤增殖及转移入侵时基质溶解[9];通过增加CD40、CD54、CD58、CD80和CD83的表达而使树突状细胞表型成熟,具有免疫增强效应[10,11];HMGB1可诱导成年和胚胎血管相关干细胞迁移与增殖,参与组织再生[12]。目前,我们对HMGB1的了解仍很肤浅,许多问题亟待解决,如HMGB1生物学合成的调节与释放的确切机制是什么?细胞膜表面HMGB1不诱导炎症而仅促进细胞生长?HMGB1靶向性抗炎治疗是否会妨碍神经轴突生长及基础修复机制?以及HMGB1在疾病如脓毒症、肿瘤等发生、发展及预后中的作用与临床意义?随着研究的深入,这些问题将得到解决。本研究中,我们制备具有功能活性的人HMGB1,并以此为免疫原免疫兔,获得兔抗人HMGB1多克隆抗体,旨在为深入探讨人HMGB1的生物学特点及其与相关疾病的关系奠定基础。方法:1.人HMGB1 cDNA的克隆自人扁桃体组织提取细胞总RNA,以RT-PCR法扩增人HMGB1 cDNA片段,将此片段连接于pUC19质粒后送上海生工公司测序。2.重组原核表达质粒的构建将人HMGB1 cDNA片段插入原核表达载体pQE-80L,然后行酶切鉴定。将所构建的重组表达质粒命名为pQE-80L/HMGB1。3.目的蛋白的诱导表达与鉴定将构建的重组表达质粒pQE-80L/HMGB1转化
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