催乳素化学发光免疫分析技术的研究

论文摘要

催乳素是一种重要的性腺激素,在人和动物体内具有多种功能,促进乳腺发育、启动和维持泌乳、调控个体生殖生理、调节免疫活动和渗透压、传递神经系统信号等活动。因此催乳素含量既是反映生长发育的一个指标,也是提示一些免疫性和神经性疾病的一个指标。化学发光免疫分析法（CLIA）具有简便、灵敏、线性范围宽等特点在国外得到应用。国内主要依赖进口产品,价格昂贵。本研究采用免疫分析中抗原、抗体特异性结合的原理,结合酶促化学发光系统对催乳素微孔板式化学发光免疫分析方法进行了研究。结果如下:（1）对三种化学发光液进行了发光值、平台期等发光液重要参数进行了比较,选定BioFX公司的化学发光液为本研究化学发光底物,对工作浓度进行优化,得到了在本检测体系下具有良好发光效果和稳定平台期的化学发光底物液。（2）采用过碘酸钠法,用辣根过氧化物酶（HRP）标记催乳素（PRL）单克隆抗体,得到较好免疫活性的标记抗体,并保持了辣根过氧化物酶较高的催化活性。用催乳素单克隆抗体作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体作为检测抗体,对检测中的各种缓冲液进行了筛选,优化了检测条件。采用双抗体夹心一步法,结合酶促化学发光检测体系,建立了检测血清中催乳素的化学发光酶联免疫分析法（CLEIA）。（3）对本方法进行了应用评价和技术验证。结果表明:本方法检测时间约为两小时;检测范围为5100ng/mL;标准曲线的线性关系r>0.995;与促卵泡生成素、促黄体生成素、人绒毛促性腺激素、生长激素和促甲状腺素无交叉反应;灵敏度为0.49ng/mL;分析内精密度小于9%,分析间精密度小于12%;回收率在90108%之间;当浓度值达到1500ng/mL左右会出现HOOK效应。本方法与放射免疫分析（RIA）和罗氏化学发光试剂盒均有良好的相关性。试剂盒在-20℃可保存12个月。本法已超过目前已有的国家检定标准,并与国外同类产品检测水平相当。本方法灵敏度高、特异性好、操作简便、时间短,可用于临床大量催乳素样本的检测。

论文目录

• 内容提要
• 英文缩写词表
• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 催乳素的研究进展
• 第二章 化学发光免疫分析技术的研究现状
• 第二篇 研究内容
• 第一章 化学发光液的筛选及工作条件的优化
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 CLEIA 检测催乳素方法的建立及优化
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 催乳素CLEIA 检测试剂盒各项技术参数的研究
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢