论文摘要
本项研究采用基因转染技术,将编码人抵抗素基因pcDNA3.1（+）真核表达载体转染入HepG2细胞,通过RT-PCR和免疫细胞化学方法证实抵抗素基因和蛋白质在细胞内表达,完成了稳定转染,建立了表达抵抗素基因的肝细胞株。然后对抵抗素基因转染的细胞进行了抵抗素基因转染对细胞葡萄糖摄取作用影响的研究,抵抗素基因转染对转录因子Sp1和PPARγ（过氧化物酶体增殖物激活受体-γ）mRNA表达水平影响的研究,抵抗素基因转染对细胞活性氧含量影响的研究等。研究结果表明:抵抗素基因转染可导致HepG2细胞对胰岛素刺激的葡萄糖摄取能力的下降,诱导肝源性胰岛素抵抗的形成,抵抗素基因转染对胰岛素促进细胞生长作用也产生抵抗,抵抗素基因转染细胞活性氧含量增加,转录因子Sp1mRNA表达显著上调,而PPARγmRNA表达改变不明显,但有下降趋势。罗格列酮处理后,PPARγmRNA表达在HepG2细胞和抵抗素基因转染细胞中均有下降,尤在抵抗素基因转染细胞中下降更明显,有显著的统计学差异。这些结果表明,通过本项研究进一步明确肯定了抵抗素对肝源性胰岛素抵抗形成的诱导作用,阐明了转录因子Sp1和PPARγmRNA在抵抗素诱导的肝源性胰岛素抵抗状态下表达的相互变化关系,证实了活性氧在胰岛素抵抗形成中的作用,研究表明罗格列酮的改善胰岛素敏感性作用,可能与其抗氧化应激作用也有关系,这为罗格列酮治疗2型糖尿病提供了一个新的视角。而罗格列酮应用后导致的细胞本身PPARγmRNA表达的下调,为临床合理联合应用抗氧化剂和噻唑烷二酮类药物治疗糖尿病提供了新的理论和实验依据。