氨基酸对小鼠胚胎体外发育的影响

论文摘要

以昆明小鼠体内受精胚胎(原核胚)为试验材料,探讨氨基酸对昆明小鼠体内受精胚胎体外发育的影响,旨在寻找一种能有效支持昆明小鼠胚胎体外发育的氨基酸组成,优化小鼠胚胎体外培养体系。并且,为其它哺乳动物胚胎的体外培养提供参考和借鉴。论文包括四个部分,研究结果如下:(1)研究了模拟小鼠输卵管液水平的氨基酸(OAA)和Sigma氨基酸(SAA)对小鼠原核胚各个发育阶段的影响,并以不添加氨基酸组作为对照。结果显示,三组之间的2细胞率为88.74%、71.28%和69.51%,1倍OAA组显著高于未添加氨基酸组和SAA组(P＜0.05);三组之间的4细胞率、桑椹胚率、囊胚率和囊胚孵化率差异不显著(P＞0.05),但1倍OAA组的培养效率较佳。(2)研究了1倍、0.5倍、0.25倍和0倍浓度的OAA对小鼠原核胚发育的影响,结果发现,四组间的2细胞率分别为89.51%、78.36%、74.62%和74.68%,1倍OAA组显著地高于0.25和0倍OAA组(P＜0.05);4细胞率分别为66.28%、71.27%、71.61%和52.50%,0.5和0.25倍OAA组显著高于0倍OAA组(P＜0.05);桑椹胚率分别为44.59%、58.77%、50.96%和41.78%,0.5倍OAA组显著高于未添加OAA组(P＜0.05);囊胚率分别为29.09%、41.71%、33.26%和22.18%,0.5倍OAA组显著高于0和1倍OAA组(P＜0.05);各细胞水平上其它各组间差异不显著(P＞0.05),除了2细胞外,其它细胞水平上以0.5倍OAA组的培养效果最佳。(3)结合以上两个试验的结果,对小鼠胚胎采取分段培养,在1倍OAA组中培养24h后再移入含SAA、0.5倍OAA和1倍OAA组的培养液中继续培养。结果发现,三组的囊胚率分别为13.23%、28.46%和23.77%,0.5倍OAA组显著高于SAA组(P＜0.05);各细胞水平上其它各组间差异不显著(P＞0.05),但以0.5倍OAA组最高。(4)将小鼠原核胚在含有1倍ONEAA和X3的HTF培养液中(25μL/滴)分别培养24h、48h和72h后再添加25μL含有1倍模拟输卵管液水平的非必需氨基酸(ONEAA)和2倍模拟输卵管液水平的必需氨基酸(OEAA)的HTF培养液继续培养。结果发现:三组间桑椹胚率分别为41.99%、50.76%和61.53%,72h添加OEAA组显著高于24h添加OEAA组(P＜0.05);囊胚率分别为21.69%、35.64%和45.26%,72h添加OEAA组极显著地高于24h添加OEAA组(P＜0.01),48h添加OEAA组显著地高于24h添加OEAA组(P＜0.05);囊胚孵化率分别为4.44%、10.71%和22.49%,72h添加OEAA组极显著地高于24h添加OEAA组(P＜0.01),同时显著高于48h添加OEAA组(P＜0.05),各细胞水平上其它各组间差异不显著(P＞0.05),但以72h添加OEAA组为最高。OEAA对小鼠桑椹胚前胚胎发育具有阻断作用,对桑椹胚后的胚胎具有促进作用。综上所述,小鼠原核胚培养过程中,选择添加模拟输卵管液水平的氨基酸(OAA),先使用含有1倍模拟输卵管液水平的谷氨酰胺、精氨酸、牛磺酸和ONEAA的培养液中培养至桑椹胚阶段,然后再在含有1倍OEAA继续培养可得到最佳的培养效果。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 文献综述
• 引言
• 1 材料和方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试剂和药品
• 1.3 主要仪器
• 1.4 主要试剂与培养液配制
• 1.5 小鼠超数排卵
• 1.6 小鼠原核胚的采集
• 1.7 小鼠原核胚的培养
• 1.8 试验设计
• 1.9 胚胎发育判定标准
• 1.10 统计分析
• 2 结果
• 2.1 OAA和SAA对小鼠原核胚体外发育影响
• 2.2 不同水平的OAA对小鼠原核胚体外发育影响
• 2.3 SAA、0.5倍和1倍OAA组合对小鼠胚胎体外发育影响
• 2.4 OEAA对不同时期的小鼠胚胎体外发育影响
• 3 讨论
• 3.1 OAA和SAA对小鼠原核胚体外发育影响
• 3.2 不同水平的OAA对小鼠原核胚体外发育影响
• 3.3 SAA、0.5倍和1倍OAA组合对小鼠胚胎体外发育影响
• 3.4 OEAA对不同时期的小鼠胚胎体外发育影响
• 4 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简介