NMDA受体拮抗剂诱导的精神分裂症动物模型的谷氨酸能机制与氧化应激的相关性研究

论文摘要

精神分裂症是危害人类健康的一大顽疾，对其病因和发病机制的研究一直众说纷纭，没有明确而合理的解释，因此，建立合适的动物模型并对其发病机制进行系统研究十分必要。本文根据目前比较流行的精神分裂症谷氨酸（Glutamate，Glu）功能紊乱假说，分别从行为学、免疫组织化学和神经生化学方面对N—甲基—D—天门冬氨酸（N-methyl-D-aspartate，NMDA）受体拮抗剂所诱导的精神分裂症动物模型的谷氨酸能机制与氧化应激的相关性进行了系统的研究，希望能为精神分裂症的发病机制和治疗方法提供新的思路。 首先，我们应用不同剂量的NMDA受体拮抗剂地卓西平马来酸盐（Dizocilpine maleate，MK-801）和氯胺酮（Ketamine，KET）考察了小鼠自主活动、定型行为、爬杆行为和悬吊行为的变化。结果表明，MK-801（0.3 mg／kg、0.6 mg／kg、1.5 mg／kg，i．p．）和KET（25 mg／kg、50 mg／kg、100 mg／kg，i．p．）不同剂量单次给药均可不同程度地诱导小鼠产生精神分裂症样症状，其中以中、高剂量组表现更为明显。两种药物不同剂量连续给药8d时间内，小鼠的爬杆行为和悬吊行为能力明显下降，出现更明显的共济失调；低剂量组小鼠的自主活动随给药时间的延长明显增加，而中、高剂量组则随给药时间的延长自主活动有所减少，以高剂量更为明显。MK-801和KET各剂量组在连续给药8d时间内小鼠定型行为的得分随给药时间的延长均有所升高。单次给药与连续给药后行为表现的不同提示二者可能存在不同的作用机制。 以上结果表明，MK-801 0.6 mg／kg既可以诱导小鼠的运动亢进，又表现有明显的定型行为和共济失调，适合进行下面的一些神经生化学实验研究，便于深入探讨精神分裂症的发病机理。因此，我们采用微透析技术结合HPLC-ECD的方法系统研究了MK-801单次给药或连续给药及局部灌注给药对小鼠前皮层（Prefrontal cortex，PFC）细胞外液中Glu、抗坏血酸（Ascorbic acid，AA）、多巴胺（Dopamine，DA）及其代谢产物二羟苯乙酸（3，4-Dihydroxyphenylacetic acid，DOPAC）和高香草酸（Homovanillic acid，HVA）水平的影响，结果发现，MK-801单次给药能明显增加小鼠PFC细胞外液中Glu、AA、DA及其代谢产物的水平；连续给药7d后，基础AA水平明显降低，基础Glu水平也有降低的趋势，基础DA水平明显升高；在第八天再次给药能够明显降低透析液中AA和Glu的水平，DA水平进一步升高，但升高

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 NMDA受体拮抗剂精神分裂症动物模型的建立
• 1.实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 药品与试剂
• 1.3 实验仪器
• 2.实验方法
• 2.1 模型制备与给药
• 2.2 行为学实验
• 2.3 统计学处理
• 3.实验结果
• 3.1 急性给药对小鼠行为学的影响
• 3.2 连续给药对小鼠行为学的影响
• 4.讨论
• 5.小结
• 第二章 MK-801全身和局部给药对小鼠前皮层中谷氨酸、抗坏血酸、多巴胺及其代谢产物水平的影响
• 1.实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 药品与试剂
• 1.3 实验仪器
• 2.实验方法
• 2.1 脑微透析实验方法
• 2.2 给药方式与剂量
• 2.3 AA的含量测定方法
• 2.4 Glu的含量测定方法
• 2.5 单胺类递质的含量测定方法
• 2.6 自主活动的测定
• 2.7 统计学处理
• 3.实验结果
• 3.1 HPLC-ECD检测AA、Glu、DA及其代谢产物的线性关系
• 3.2 小鼠PFC细胞外液中AA、Glu、DA及其代谢产物的基础含量
• 3.3 MK-801单次给药对小鼠PFC细胞外液中AA和Glu水平的影响
• 3.4 MK-801单次给药对小鼠PFC中DA及其代谢产物水平的影响
• 3.5 MK-801连续给药对小鼠PFC细胞外液中AA和Glu水平的影响
• 3.6 MK-801连续给药对小鼠PFC中DA及其代谢产物水平的影响
• 3.7 MK-801 PFC局部给药对小鼠PFC中Glu和AA水平的影响
• 3.8 MK-801 PFC局部给药对小鼠PFC中DA及其代谢产物水平的影响
• 3.9 MK-801单次给药对小鼠自主活动的影响
• 3.10 MK-801连续给药对小鼠自主活动的影响
• 3.11 MK-801 PFC局部给药对小鼠自主活动的影响
• 3.12 神经递质与行为的相关性研究
• 4.讨论
• 4.1 MK-801对小鼠PFC中Glu和AA水平的影响
• 4.2 MK-801对小鼠PFC中DA及其代谢产物水平的影响
• 4.3 神经递质与行为的相关性
• 5.小结
• 第三章 MK-801对小鼠脑中c-Fos蛋白表达的影响
• 1.实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 药品与试剂
• 1.3 实验仪器
• 2.实验方法
• 2.1 给药方案
• 2.2 脑组织标本的采集
• 2.3 脑切片及其定位
• 2.4 免疫组织化学方法
• 2.5 统计学处理
• 3 实验结果
• 3.1 MK-801单次给药后小鼠c-fos表达的时效关系
• 3.2 MK-801单次给药后小鼠c-fos表达的量效关系
• 3.3 MK-801单次给药对小鼠不同脑区c-fos表达的影响及氯氮平的作用
• 3.4 MK-801连续给药对小鼠不同脑区c-fos表达的影响及氯氮平的作用
• 3.5 MK-801单次给药和连续给药对不同脑区c-fos表达的比较
• 4.讨论
• 5.小结
• 第四章 MK-801对小鼠脑中自由基水平及一氧化氮合酶表达的影响
• 1.实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 药品与试剂
• 1.3 实验仪器
• 2.实验方法
• 2.1 给药方案
• 2.2 免疫组化实验方法
• 2.3 脑微透析实验方法
• 2.4 ·OH的含量测定方法
• 2.5 NO的含量测定方法
• 2.6 统计学处理
• 3.实验结果
• 3.1 HPLC—ECD检测2,3-DHBA的线性关系
• 3.2 酶标仪检测亚硝酸盐的线性关系
• 3.3 小鼠PFC中2,3-DHBA和总亚硝酸盐的基础水平
• 3.4 小鼠PC／RS中2,3-DHBA和总亚硝酸盐的基础水平
• 3.5 单次给药对小鼠PFC中2,3-DHBA和总亚硝酸盐水平的影响
• 3.6 连续给药对小鼠PFC中2,3-DHBA和总亚硝酸盐水平的影响
• 3.7 单次给药对小鼠PC／RS中2,3-DHBA和总亚硝酸盐水平的影响
• 3.8 连续给药对小鼠PC／RS中2,3-DHBA和总亚硝酸盐水平的影响
• 3.9 MK-801单次给药对小鼠不同脑区nNOS表达的影响及氯氮平的作用
• 3.10 MK-801连续给药对小鼠不同脑区nNOS表达的影响及氯氮平的作用
• 3.11 MK-801单次给药和连续给药对不同脑区nNOS表达的影响的比较
• 4.讨论
• 4.1 MK-801对小鼠脑中·OH水平的影响
• 4.2 MK-801对小鼠脑中NO水平及nNOS表达的影响
• 5.小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
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