高甘油三脂血症对血小板CD40L表达的影响及非诺贝特的作用

论文摘要

研究背景及总体思路最近一系列研究进一步认识到动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）潜在的病理生理机制,各种证据表明AS是一种动态、进展性的炎症性疾病,血脂升高被认为是AS发生发展的基础因素,以往认为血浆中单纯甘油三脂（triglyceride,TG）与冠心病（Coronary heart disease,CHD）及AS的相关性相对较弱,但近年几项规模比较大的临床研究表明单纯TG水平与CHD及AS密切相关,高TG血症还与炎症相关,高TG患者体内各种炎症因子如C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）、白介素6（interleukin-6, IL-6）、单核细胞趋化蛋白-1（Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）等表达增加。以往认为血小板不主动参与免疫炎症反应。但近年研究发现,血小板激活后分泌炎性因子如肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）、白介素1β（interleukin-1β, IL-1β）、白介素3（interleukin-3, IL-3）、IL-6以及粘附分子如CD36等参与了免疫炎症反应;血小板微粒可促进单核细胞与内皮细胞的相互作用,并刺激单核细胞分泌粘附分子;特别是血小板可以表达CD40和CD40配体（CD40 Ligand, CD40L）的发现,血小板在免疫炎症反应中的作用受到更多重视,因为CD40/CD40L广泛参与了细胞炎症反应和免疫网络;近年已逐步认识到,血小板能够通过CD40L/CD40系统诱导内皮细胞的炎症反应,提高细胞粘附分子、促炎因子、趋化因子及组织因子的产生从而引起AS的进展。并逐渐成为研究的新领域。非诺贝特是一种人工合成的过氧化物酶体增殖活化受体α激动剂（peroxisome proliferators activated receptorα, PPARα）为目前广泛使用的调节血脂药物,其具有降低TG及轻度提升高密度脂蛋白（High-density lipoprotein, HDL）的作用,近年研究认为非诺贝特还具有调脂外的抗炎作用。基于TG在AS形成及发展中地位的提升;血小板免疫炎症功能在AS发生发展中作用研究的深入,高甘油三脂血症患者血小板CD40L及血浆可溶性CD40L（soluble CD40L,sCD40L）的表达情况如何?非诺贝特的作用如何?高甘油三脂血症患者血浆能否促使体外血小板CD40L表达增加及PPARα激动剂Wy14643体外有无直接的作用?目前尚无这些直接研究报道,因此本研究内容如下:1检测高TG血症患者非诺贝特治疗前后血脂水平和血小板CD40L表达及血浆sCD40L浓度变化。2观察高TG血症患者血浆对体外血小板CD40L表达的影响及贝特类药物的直接活性剂Wy14643的作用?第1节高TG血症患者非诺贝特治疗前后血小板CD40L表达、血浆sCD40L浓度变化目的探讨单纯高TG血症患者血小板CD40L及sCD40L的表达情况及非诺贝特的作用。方法选择20例TG升高而TC不高的单纯TG血症患者,非诺贝特治疗4周（200mg/日）,治疗前后检测血脂变化、流式法检测血小板CD40L表达,ELISA法检测血浆sCD40L的浓度。结果1高TG治疗前组TG水平明显较对照组及治疗后组为高（4.57±0.64 VS 1.23±0.32,4.57±0.64 VS 3.54±0.73,P均<0.05）,胆固醇浓度在各组间无显著差异（3.70±0.88 VS 3.80±0.79,3.70±0.88 VS 3.94±0.89,P均>0.05）2高TG治疗前组血小板CD40L表达阳性率明显较对照组高（2.65±0.75 VS1.53±0.66,P<0.01）,高TG治疗后组血小板CD40L表达阳性率较高TG治疗前组有显著降低（1.89±0.56 VS 2.65±0.75,P<0.05）。3高TG治疗前组血浆sCD40L浓度较对照组高（3.72±0.94 VS 2.27±0.72,P<0.05）,高TG治疗后组血浆sCD40L浓度较高TG治疗前组有显著降低（2.85±0.74 VS 3.72±0.94,P<0.05）。4血浆TG浓度与血小板CD40L表达阳性率之间存在线性相关（r=0.403,n=60,P<0.01）。5血浆TG浓度与血浆sCD40L浓度之间存在线性相关（r=0.451,n=60,P<0.01）。5血浆sCD40L浓度与血小板CD40L表达阳性率之间存在线性相关（r=0.643,n=60,P<0.01）。第2节体外高TG血浆对血小板CD40L表达的影响及Wy14643的作用目的进一步探讨高TG血浆在体外能否引起血小板CD40L表达的升高及非诺贝特类药物WY14643在体外有无直接作用方法1购买机采血小板,并进一步白细胞过滤,使血小板达到实验所需质量要求,并对其进行体外保存培养。2高TG患者血浆体外培养健康人血小板并用Wy14643干预,检测血小板CD40L阳性表达率、CD40L蛋白表达情况,研究高TG血浆对血小板CD40L表达的直接影响及Wy14643的直接作用。3实验分组:根据实验方案分为4组（n=18）（1）对照组:12小时内健康人血小板。（2）正常TG组:正常健康人血浆培养血小板,22℃水平振荡培养4天。选择3人份血浆,每份血浆培养血小板6次。选择标准:健康中年男性,无吸烟嗜好。（3）高TG组:高TG血症患者血浆培养血小板,培养条件同第2组。选择标准:单纯高TG血症中年男性,无吸烟嗜好。（4）WY14643干预组:高TG血浆培养血小板并同时加入高浓度WY14643（100μmol/L）,血浆来源同第3组,培养条件同第2组。结果1高TG组血浆培养血小板4天血小板CD40L表达阳性率较对照组及正常TG组显著升高（2.81±0.48 VS 0.75±0.41,2.81±0.48 VS 1.89±0.41,P均<0.01）,WY14643干预组血小板CD40L表达阳性率较高TG组未见明显改变（2.73±0.45 VS 2.81±0.48,P>0.05）正常TG组血小板CD40L阳性表达率亦较对照组升高（1.89±0.41 VS 0.75±0.41,P<0.01）。2将培养血浆中TG浓度与血小板CD40L表达阳性率进行直线回归分析,发现TG与血小板CD40L表达阳性率之间有线性关系（P<0.05）3高TG组血小板CD40L蛋白的表达较正常TG组显著升高（1.79±0.13 VS 1.51±0.15,P<0.01）;Wy14643组与高TG组相比血小板CD40L蛋白表达无明显变化（1.80±0.12 VS 1.79±0.13,P>0.05）;正常TG组血小板CD40L蛋白表达亦较对照组有较显著的升高（1.51±0.15 VS 0.97±0.09,P<0.01）。结论CD40L/CD40广泛参与了机体的免疫炎症反应,血小板在某些活化因子作用下,其表面CD40L表达迅速增加,称之为免疫活化。高TG血症患者血小板CD40L阳性表达率及血浆sCD40L浓度明显升高,表明高TG血症患者有一定程度的血小板免疫活化,推测促进血小板免疫活化及血浆炎症因子sCD40L升高可能是高TG促进AS发生、发展的重要途径之一。非诺贝特治疗一个月后,血小板CD40L阳性表达率明显降低,sCD40L浓度也显著降低,推测非诺贝特在体内有一定抑制血小板免疫活化及炎症反应的作用。sCD40L与血小板CD40L表达阳性率呈显著相关表明部分血浆sCD40L可能来自血小板免疫活化后膜蛋白CD40L的脱落和释放。血小板在体外培养过程中,较长时间培养（4天）本身能够一定程度增加血小板CD40L表达阳性率的增加即促进血小板免疫活化,可能与血小板体外培养有一定程度的血小板激活有关,而体外高TG血症血浆更能显著促进血小板CD40L表达阳性率的增加。血浆TG浓度与血小板CD40L表达程度具有线性关系,有报道TG能够促进体外白细胞的激活。本研究推测TG或运载TG的VLDL可能直接或间接促进了体外血小板的免疫活化,血小板在免疫活化的同时CD40L蛋白含量也明显增加,Wy14643在体外无抑制血小板CD40L表达的作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 材料与方法
• 第一节 高TG 血症患者血小板CD40L、血浆sCD40L 改变及非诺贝特作用研究
• 实验材料与方法
• 结果
• 第二节 高TG 血症血浆对体外血小板CD40L 表达的影响及Wy14643 作用
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录A
• 附录B
• 攻读学位期间的研究成果