马铃薯疮痂病菌拮抗菌的鉴定及抑菌药剂室内筛选

论文摘要

马铃薯疮痂病（Potato scab）是由植物病原链霉菌（Steptomyces spp.）引起的经济性病害。目前该病害在中国各马铃薯产区均有不同程度发生,对我国马铃薯生产的危害逐渐加重,亟需寻找有效可行的防治方法。我们在前期工作中通过对我国的马铃薯疮痂病菌进行采集和分离鉴定,已经初步掌握了主要的病原菌组成。本文对前期发现的拮抗菌株ZWQ-1进行了鉴定,并以不同疮痂病原菌为指示菌筛选抑菌药剂,同时对拮抗菌株和化学药剂协同作用进行了研究。通过菌株的形态学、生理生化特征并结合16S rDNA序列分析,对拮抗菌株ZWQ-1进行分类鉴定。菌株ZWQ-1为革兰氏阳性,菌体杆状,利用葡萄糖,蔗糖,果糖,甘露醇产酸,可还原硝酸盐为亚硝酸盐,水解淀粉和明胶,接触酶反应和V-P试验阳性,不能利用柠檬酸盐。利用获得的该菌16S rDNA序列（1610 bp）构建系统发育树,发现其与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis JQ398853、JN399219的亲缘关系最近（99%）,因此将菌株ZWQ-1鉴定为枯草芽孢杆菌。纸碟法测定结果表明,菌株ZWQ-1对4种不同的马铃薯疮痂病菌均有一定的拮抗作用,抑菌带宽度为6.59 mm18.75 mm。对其抑菌谱测定发现,该菌株对棉花红粉病菌、棉花黄萎病菌和葡萄灰霉病菌均表现出了较强的抑制作用,抑菌带宽度均达到20.00 mm以上。因此该菌株具有较大的开发应用潜力。本研究对47种药剂进行了室内抑菌筛选。结果表明,72%农用链霉素、90%新植霉素、硫酸庆大霉素、硫酸新霉素对4株马铃薯疮痂病菌具有较好的抑制效果。其中农用链霉素(959μg·mL-1)对S. scabies CPS-1的抑菌效果最好,抑菌圈直径达到22.23 mm;新植霉素(1199μg·mL-1)和农用链霉素(959μg·mL-1)对S. galilaeus CPS-2抑菌效果较好,抑菌圈直径分别为30.48 mm和30.42 mm;硫酸庆大霉素(500μg·mL-1)对S. acidiscabies CPS-3抑菌效果最佳,抑菌圈直径为30.93 mm;农用链霉素(959μg·mL-1)、硫酸庆大霉素(500μg·mL-1)和新植霉素(1199μg·mL-1)对S. turgidiscabies SHXHZ-3的抑菌效果较好,分别为37.56 mm、35.26 mm和31.83 mm。同时对可与拮抗菌株ZWQ-1协同作用的药剂进行了筛选,结果表明,盐酸林可霉素(500μg·mL-1)、吗呱·乙酸铜(668μg·mL-1)等8种药剂对拮抗菌株ZWQ-1影响较小,可用于协同防治病害。温室盆栽防效测定结果表明,拮抗菌株ZWQ-1对4种马铃薯疮痂病原菌的防治效果为54.68%79.09%。硫酸新霉素(800μg·mL-1)、盐酸林可霉素(500μg·mL-1)对CPS-1的防效为85.01%和80.00%;硫酸新霉素(500μg·mL-1)对CPS-2的防效为80.96%;农用链霉素(959μg·mL-1)、硫酸庆大霉素(800μg·mL-1)对CPS-3的防效为88.11%和81.89%;硫酸庆大霉素(800μg·mL-1)、霜脲氰(1200μg·mL-1)对SHXHZ-3的防效为72.46%和72.02%。拮抗菌ZWQ-1与吗呱·乙酸铜(668μg·mL-1)协同防治CPS-1和CPS-3的效果最好,防效为94.01%和88.47%。拮抗菌ZWQ-1与盐酸林可霉素(500μg·mL-1)协同防治CPS-2的效果最好,防效达90.48%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 引言
• 1.1 马铃薯疮痂病的发生和危害
• 1.2 国外马铃薯疮痂病研究进展
• 1.2.1 对马铃薯疮痂病菌的研究
• 1.2.2 对马铃薯疮痂病防治方面的研究
• 1.3 国内马铃薯疮痂病研究进展
• 1.3.1 对马铃薯疮痂病菌的研究
• 1.3.2 对马铃薯疮痂病防治方面的研究
• 1.4 本项研究的切入点和意义
• 第二章 马铃薯疮痂病菌拮抗菌ZWQ-1 的鉴定及抑菌活性测定
• 2.1 供试材料
• 2.1.1 供试菌株
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 培养基
• 2.1.4 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 菌落和菌体形态观察与生理生化特性测定
• 2.2.2 拮抗菌ZWQ-1 菌株总DNA 的提取
• 2.2.3 拮抗菌ZWQ-1 菌株16S rDNA 的PCR 扩增
• 2.2.4 测序及系统发育分析
• 2.2.5 拮抗菌ZWQ-1 抑菌能力测定
• 2.2.6 数据处理
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 菌落形态
• 2.3.2 菌体形态
• 2.3.3 菌株ZWQ-1 的生理生化特性
• 2.3.4 菌株 ZWQ-1 16S rDNA 序列分析结果
• 2.3.5 拮抗菌ZWQ-1 对病原菌的抑菌效果
• 2.4 讨论
• 第三章 马铃薯疮痂病菌抑菌药剂筛选
• 3.1 供试材料
• 3.1.1 供试菌株
• 3.1.2 培养基
• 3.1.3 供试药剂
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 室内药剂筛选
• 3.2.2 室内药剂毒力测定
• 3.2.3 拮抗菌株ZWQ-1 与抑菌药剂可协同作用筛选
• 3.2.4 数据处理
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 不同药剂对马铃薯疮痂病菌的抑制作用
• 3.3.2 不同药剂对马铃薯疮痂病菌的最低有效浓度
• 3.3.3 可与菌株ZWQ-1 协同作用的药剂
• 3.4 讨论
• 第四章 温室盆栽防效测定
• 4.1 供试材料
• 4.1.1 供试菌株
• 4.1.2 供试药剂
• 4.1.3 供试马铃薯品种
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 温室盆栽药效试验
• 4.2.2 马铃薯疮痂病分级标准及统计方法
• 4.2.3 数据处理
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 拮抗菌ZWQ-1 的盆栽防病效果
• 4.3.2 抑菌药剂的盆栽防病效果
• 4.3.3 拮抗菌ZWQ-1 与5 种抑菌药剂协同防治的盆栽实验测定
• 4.4 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 附录
• 在读期间发表的论文
• 作者简介
• 致谢