欧文氏杆菌变异菌株CXJZ11-01分泌木聚糖酶的分离纯化及其酶学性质研究

论文摘要

本文采用透明圈平板筛选、单因子及多因子正交试验、超滤浓缩、Sephadex G-100凝胶层析、SDS-PAGE等方法,从现有菌种资源筛选出一个产木聚糖酶菌株,并对该菌株的适宜发酵条件、产酶规律、分离纯化方法和酶学特性进行了初步研究,得到电泳纯木聚糖酶样品,为木聚糖酶的工业化生产和应用提供了科学依据。通过本实验得出以下结论:1、从现有菌种资源中筛选出1个高产木聚糖酶的Erwinia carotovora变异菌株（编号CXJZ11-01）;2、获得该菌株适宜生长和发酵培养基最佳配方;以蛋白胨作为该菌株发酵培养基的碳源,发酵8.0h即出现产酶高峰,发酵液酶活达到344U/ml。3、变异菌株CXJZ11-01所产木聚糖酶最佳测定体系:0.1mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液;pH5.8;以木聚糖为底物,浓度0.8%;温度60℃;DNS量2.02.5ml;显色时间5min;测定波长540nm。4、变异菌株CXJZ11-01所产木聚糖酶优化分离条件为:50kD、10kD、5kD膜包超滤浓缩及Sephadex G-100凝胶层析。木聚糖酶的纯化倍数为13.25,收率为45.4%,通过SDS-PAGE得到单一条带,测定其分子量为29.3kD。5、变异菌株CXJZ11-01所产木聚糖酶的酶学性质为:稳定pH范围3.46.4,酶的作用pH范围4.07.0,最适pH5.8;该酶的热稳定温度在60℃以下,适宜温度范围是3560℃;Fe2+、Co2+和Mn2+对木聚糖酶有激活作用,Cu2+对木聚糖酶有强烈的抑制作用,酶液在2mmol/L的Cu2+溶液中保存12h,酶活损失93%;以燕麦木聚糖为底物,Km为0.5mg/L,Vmax为33.31μmol/（min?ml）。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第一章 文献综述
• 1.1 木聚糖
• 1.2 木聚糖水解酶
• 1.3 木聚糖酶的来源及其性质
• 1.4 木聚糖酶的分类、性质及酶活测定
• 1.5 木聚糖酶的分离、纯化
• 1.6 木聚糖酶的应用
• 1.7 本研究的目的与意义
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 第三章 结果与分析
• 3.1 高产木聚糖酶菌的筛选
• 3.2 培养基的优化
• 3.3 产酶规律研究
• 3.4 酶活力测定技术体系
• 3.5 木聚糖酶分离技术
• 3.6 木聚糖酶酶学性质
• 第四章 讨论
• 4.1 变异菌株CXJZ11-01 产酶的生产效率评价
• 4.2 超滤条件的选择
• 4.3 变异菌株CXJZ11-01 分泌的木聚糖酶可能为非诱导型表达
• 4.4 变异菌株 CXJZ11-01 分泌的木聚糖酶可能为单体蛋白
• 4.5 变异菌株CXJZ11-01 分泌木聚糖酶的纯化步骤还有待进一步探索
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介