中国番茄黄化曲叶病毒（TYLCCNV）遗传标记突变体的构建

论文摘要

双生病毒科病毒是植物病毒中唯一具有单链环状DNA（single stranded DNA，ssDNA）病毒。已有的研究发现双生病毒的种群结构类似准种（qluasispecies），而且重组是双生病毒进化的重要驱动力。为研究双生病毒准种种群在单个植株内系统扩散和植株间传播过程中的变化以及重组频率，需要一个遗传标记的病毒群体。本论文以已有的中国番茄黄化曲叶病毒（TYLCCNV）Y10侵染性克隆（TYLCCNV-Y10 pBinPLUS-1.7A）为材料，通过overlap PCR技术，在不改变编码氨基酸的前提下分别在基因组的IR5、区第45位碱基以T替代C，创造含MluI酶切位点；AV2区第277位碱基以T替代为A，以及第281位碱基A替代为C，创造Sac I酶切位点；AV1区第575位碱基以C替代G，创造Mlu I酶切位点；AC1区第1675位以碱基A替代为G，创造Sma I酶切位点的突变体4个。酶切和测序结果表明以上酶切位点已经被正确引入，接种本氏烟的结果初步显示，带有分子标记的TYLCCNV-Y10 pBinPLUS-1.7A侵染性克隆突变体具有侵染性。这些突变体的在本氏烟和番茄等寄主上的积累水平和相对适应性有待进一步确认。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.植物病毒的种群结构
• 1.1 植物病毒的种群遗传结构特征
• 1.2 植物RNA病毒的种群遗传结构特征
• 1.3 植物DNA病毒的种群遗传结构特点
• 2.双生病毒概况
• 2.1 双生病毒基因组结构
• 2.1.1 玉米线条病毒属（Mastrevirus）
• 2.1.2 甜菜曲顶病毒属（Curtovirus）和番茄伪曲顶病毒属（Topocuvirus）
• 2.1.3 菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus）
• 2.2 双生病毒的移动
• 2.2.1 双组分双生病毒的移动
• 2.2.2 单组份双生病毒的移动
• 2.3 双生病毒的复制
• 2.3.1 在病毒复制过程中病毒编码的蛋白的作用
• 2.3.2 双生病毒对寄主细胞周期的调节
• 2.3.3 双生病毒复制结构域
• 2.3.4 双生病毒的复制机制
• 2.4 双生病毒遗传重组的研究进展
• 3.存在的问题与展望
• 第二章 中国番茄黄化曲叶病毒（TYLCCNV）遗传标记突变体的构建
• 1.材料和方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 寄主材料
• 1.1.2 病毒侵染性克隆
• 1.1.3 菌株和克隆载体
• 1.1.4 常用试剂和仪器（附录）
• 1.2 方法
• 1.2.1 TYLCCNV-Y10 pMD18-0.9A克隆构建
• 1.2.2 构建TYLCCNV-Y10 pMD18-0.9A克隆的限制性内切酶标记突变体
• 1.2.3 构建含有分子标记的TYLCCNV-Y10 pBinPLUS-1.7A侵染性克隆突变体
• 1.2.4 突变体致病性测定
• 1.2.5 突变体混合种群中各突变体的酶切鉴定
• 2.结果与分析
• 2.1 TYLCCNV-Y10 pMD18-0.9A克隆构建
• 2.2 构建TYLCCNV-Y10 pMD18-0.9A克隆的限制性内切酶标记突变体
• 2.2.1 TYLCCNV-Y10 pMD18-0.9A Mlu I 45的构建
• 2.2.2 TYLCCNV-Y10 pMD18-0.9A Sac I 277的构建
• 2.2.3 TYLCCNV-Y10 pMD18-0.9A Mlu I 575的构建
• 2.2.4 TYLCCNV-Y10 pMD18-0.9A Sma I 1675的构建
• 2.3 含有分子标记的TYLCCNV-Y10 pBinPLUS-1.7A侵染性克隆突变体的构建
• 2.3.1 TYLCCNV-Y10 pBinPLUS-1.7A Mlu I 45的构建
• 2.3.2 TYLCCNV-Y10 pBinPLUS-1.7A Sac I 277的构建
• 2.3.3 TYLCCNV-Y10 pBinPLUS-1.7A Mlu I 575的构建
• 2.3.4 TYLCCNV-Y10 pBinPLUS-1.7A Sma I 1675的构建
• 2.4 突变体的致病性测定
• 2.5 突变体混合种群中各突变体的酶切鉴定
• 3.讨论
• 参考文献
• 附录A 常用生化及分子生物学试剂与仪器
• 附录B:常用试剂的配制
• 附录C:实验方法