经皮激光汽化椎间盘减压术（PLDD）治疗腰椎间盘突出症的实验及临床研究

论文摘要

目的：运用免疫组化等方法通过对不同年龄实验犬椎间盘内组织学、细胞学变化进行观察,探索不同年龄犬椎间盘内组织的差异并由此探讨自发性犬退变模型的可行性与科学性；在上述研究基础上,采用环锯法制备腰椎间盘突出症犬模型,应用PLDD技术对不同年龄犬椎间盘突出症模型进行干预,观察术后1月内犬椎间盘内组织学、细胞学的变化,由此研究PLDD技术对腰椎间盘突出症椎间盘内环境的影响。方法：实验一：2只青年犬（8月龄）和2只老年犬（6年龄）处死并各取4个椎间盘组织进行固定、包埋、切片,通过大体病理观察了解两组椎间盘的组织结构变化；应用HE染色法观察不同年龄犬椎间盘光镜下细胞形态学的变化；采用免疫组化法观察不同实验犬细胞调亡、ⅣV型胶原含量的变化,并对髓核细胞Bax、Bcl-2调亡调控基因阳性表达进行分析。实验二：16只杂种犬分为空白对照组、模型对照组、激光治疗Ⅰ组、激光治疗Ⅱ组,前三组应用青年犬（8月龄）,激光治疗Ⅱ组应用老年犬（6年龄）,后三组在自发性椎间盘退变模型基础上采用环锯法制备腰椎间盘突出症犬模型,10周后对激光治疗两组进行PLDD治疗,四组分别于术后即刻、术后7天,术后1个月按计划处死,记录造模手术及PLDD术中、术后实验犬活动征象的变化,并对四组椎间盘组织进行大体病理观察,通过对椎间盘组织固定、包埋、切片、染色,观察不同时段四组椎间盘内髓核细胞形态学的变化（HE染色法）；髓核细胞调亡情况（TUNEL法）；应用免疫组化法（SABC法）观察髓核细胞Bax、Bcl-2调控基因的变化及组织中Ⅳ型胶原细胞变化,以阳性细胞数目、面积、灰度变化为检测指标。结果：实验一：1、青年犬与老年犬在大体病理观察及HE染色细胞形态学变化上有着明显差异；2、老年犬的细胞调亡指数明显高于青年犬组；3、老年犬的髓核细胞Bax表达阳性率高于青年犬,Bcl-2表达阳性率老年犬较低；4、老年犬椎间盘组织中ⅣV型胶原含量明显低于青年犬。实验二：1、造模三组及激光治疗两组大体病理观察与空白对照组比较有明显区别；2、HE染色光镜下观察可见腰椎间盘突出症造模术后及PLDD术后椎间盘组织学和细胞形态学发生了变化,造模组纤维环缺损区有髓核突出和退变,髓核细胞中脊索细胞、软骨细胞交互存在。PLDD治疗两组术后即刻汽化空腔形成,边缘纤维环、软骨终板无明显变化。术后7天,椎间盘内有炎性细胞浸润,术后1个月,髓核空腔缩小,软骨组织替代。老年LDH犬模型PLDD术后和青年犬椎间盘的组织学变化差异较明显。3、PLDD术后激光治疗组细胞调亡Bax、Bcl-2调控基因表达阳性细胞个数、面积、灰度均较空白对照组上升,并于术后7天达到高峰,术后1个月,上述指标渐趋恢复正常；4、PLDD术后髓核组织中Ⅳ型胶原细胞个数、面积、灰度均较空白对照组下降。术后1月,渐恢复正常,老年犬的恢复明显较青年犬差。结论：实验一：1.老年犬与青年犬在大体病理、细胞学形态变化、髓核细胞调亡指数、椎间盘内ⅣV型胶原含量及髓核Bax、Bcl-2表达阳性率方面均有明显差异；2.自发性动物模型具有科学性,可以通过不同年龄犬来模拟正常及退变椎间盘。实验二：1.在自发性退变犬模型基础上采用环锯法制备腰椎间盘突出症动物模型是一种科学、有效的腰椎间盘突出症动物模型制备方法。2.PLDD术后,椎间盘组织的大体病理观察及细胞形态学受到明显影响；细胞形态学变化提示PLDD具有较高安全性；3.PLDD技术对椎间盘内细胞调亡,ⅣV型胶原含量及髓核细胞Bax、Bcl-2调控基因有明显影响,老年腰椎间盘突出症犬模型椎间盘受影响明显；4.PLDD术后椎间盘组织学、细胞学的指标随时间延长逐渐恢复,老年椎间盘恢复较青年椎间盘差,提示青少年PLDD治疗效果应优于中老年患者。目的研究一：通过对PLDD术后患者的疗效学及影像学变化进行研究,探讨疗效学与影像学间的相关性,为PLDD疗效提高提供理论依据；研究二：通过对PLDD术后早期并发症进行治疗,探讨PLDD中医因病机的变化,研究中药在PLDD术后早期的作用机理,为PLDD临床疗效的提高提供理论依据。方法研究一：36例腰椎间盘突出症患者进行PLDD治疗,对治疗后不同时间点患者的症状、体征进行评分,以观察6个月内PLDD疗效学变化；测量术前、术后即刻、3个月、6个月的突出物CT平扫变化及椎间隙高度变化,并对疗效学和影像学变化进行相关性分析。研究二：120例腰椎间盘突出症PLDD术后患者随机分为空白对照组、中药治疗组、中药对照及西药对照组,每组30例,对治疗后不同时间点四组患者症状、体征进行评分,观察患者症状、体征评分变化及客观指标血清炎症因子水平变化,对PLDD术后中医病因病机进行探讨。结果研究一：1.PLDD方法可以明显改善腰椎间盘突出症患者临床症状、体征,优良率达83.3%,疗效确切；2.PLDD术后6个月内患者突出物CT测量及椎间隙高度X线测定没有明显变化,青少年PLDD术后突出物有部分回纳；3、PLDD术后疗效学与影像学变化无明显相关性,年龄,突出物大小与疗效、回纳程度、椎间隙高度变化有明显相关性。研究二：1、PLDD术后中医学证候具有“气滞血瘀”和“热毒内蕴”的特征；2、中药方剂汽化克炎汤、桃红四物汤及西药芬必得胶囊均有改善PLDD术后早期腰腿痛症状,汽化克炎汤效果优于其它两组；3、从疗效学角度证实PLDD术后中医病因学假说具有科学性。结论研究一：1.PLDD技术是治疗腰椎间盘突出症较好的方法,疗效确切、值得推广；2、PLDD术后6个月内其影像学没有明显变化,突出物回纳不明显,疗效与影像没有明显相关性；3.PLDD术后6个月椎间隙高度无变化证实PLDD术后安全性小,副作用少。4、年龄、突出物大小与PLDD疗效呈明显正相关。研究二：中医“气滞血瘀”和“热毒内蕴”是PLDD术后主要中医证候；2、汽化克炎汤针对PLDD术后病理关键治疗,组方科学、效果良好、值得推广；3、中西医结合治疗可提高PLDD治疗腰间盘突出症的疗效。

论文目录

• 前言
• 实验部分
• 中文摘要
• 英文摘要
• 实验一 不同年龄犬模型椎间盘内组织学、细胞学变化的实验研究
• 1. 材料与方法
• 2. 结果与分析
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 实验二 PLDD疗法对犬模型椎间盘组织学、细胞学影响的实验研究
• 1. 材料及方法
• 2. 结果与分析
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 临床部分
• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究一 PLDD治疗腰椎间盘突出症的疗效学、影像学变化及其相关性研究
• 1. 研究内容及方法
• 2. 结果与分析
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 研究二 中医药在腰椎间盘突出症PLDD治疗早期的临床应用研究
• 1. 研究内容和方法
• 2. 结果与分析
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 鸣谢
• 参考文献
• 文献综述 经皮激光气化椎间盘减压术的研究进展
• 附图