基于环丙沙星—铜体系的金属硫蛋白检测新方法研究

论文摘要

金属硫蛋白（metallothioneins,MTs）是一类具有热稳定性、低分子量（通常少于10kDa）、富含半胱氨酸的蛋白质。它们存在于各类动物、植物和微生物中。涉及生物机体微量元素储存、运输和代谢、重金属解毒、拮抗电离辐射、清除自由基等各方面。由于生物体液MTs水平与环境重金属暴露具有相关关系，因此,MTs又被提议作为重金属暴露生物标志物。建立简便、快速、灵敏的MTs检测新方法不仅对于环境健康风险评价，而且对于生物体内MTs功能的研究都具有重要意义。本文第二章基于环丙沙星-铜体系建立了荧光分光光度法测定MTs的新方法。实验发现，在B-R缓冲溶液中，当十二烷基硫酸钠（sodiumdodecylsulfate,SDS）表面活性剂存在时，铜离子(Cu2+)与环丙沙星（ciprofloxacin,CIP）形成配合物，加入MTs后可使Cu2+-CIP配合物的荧光强度显著增强。据此建立了一种荧光分析新方法，该法可用于测定尿液中的MTs。在优化的实验条件下，体系的最大荧光峰位于445nm。MTs的浓度在1.70×10-8～1.23×10-6mol·L-1范围内与体系的荧光强度变化值呈良好线性关系，线性回归方程为F=2.715+44.04c(10-7mol·L-1)，r=0.9995。MTs的检出限为5.1×10-9mol·L-1。相对标准偏差分别为1.52%和2.01%。样品加标回收率分别为96.43%和96.75%。该方法简便快速，灵敏度高，选择性好，准确度高，用于尿样中MTs的测定，结果满意。文中对CIP,Cu2+和MTs相互作用及其荧光增强的机理进行了探讨。本文第三章建立了共振光散射法（resonancelightscattering,RLS）测定尿样中MTs的新方法。在pH=6.0的B-R缓冲溶液中，Cu2+与CIP形成配合物，加入MTs可使体系的共振光散射强度显著增强，最大RLS峰位于365nm处。表面活性剂SDS对反应有敏化作用。在优化的实验条件下，新建方法测定MTs的线性范围为2.56×10-71.54×10-6mol·L-1，该方法MTs的检出限为7.68×10-8mol·L-1。建立的方法操作简便快速,已成功用于加标样本的分析。相对标准偏差和加标回收率分别为5.64%、3.02%和95.13%、93.34%。文中研究了共振光散射强度显著增强的机制，并与同一体系荧光测定法进行了比较。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 前言
• 1 研究意义
• 2 检测方法研究现状
• 3 基本原理
• 4 本研究的主要内容
• 第二章 环丙沙星-铜配合物荧光光度法检测金属硫蛋白
• 1 引言
• 2 实验部分
• 3 结果与讨论
• 4 样品分析
• 5 结论
• 第三章 环丙沙星-铜配合物共振光散射法检测金属硫蛋白
• 1 引言
• 2 实验部分
• 3 结果与讨论
• 4 样品分析
• 5 结论
• 参考文献
• 主要缩写符号与对照
• 综述
• 参考文献
• 已/待发表论文
• 致谢