核受体LRH-1辅因子Prox1的生物学功能研究

论文题目: 核受体LRH-1辅因子Prox1的生物学功能研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 生物化学与分子生物学

作者: 秦骏

导师: 汪垣,谢幼华

关键词: 核受体,转录激活,辅抑制子,乙型肝炎病毒

文献来源: 中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）

发表年度: 2005

论文摘要: 核受体hLRH-1(hB1F/NR5A2)是本实验室在乙肝病毒增强子II的研究中克隆的一个转录因子,属于核受体FTZ-F1亚家族的成员。近年来LRH-1功能的研究迅速进展,目前已知LRH-1在胆汁酸合成代谢途径、肝脏特异性基因表达的调控网络以及乙肝病毒基因表达和复制中发挥着关键作用。其中在胆汁酸代谢平衡中LRH-1扮演重要角色,它调控着催化胆汁酸合成(胆固醇分解)经典途径的限速酶—CYP7A1的表达。为了深入了解LRH-1转录激活的分子机制,我们对LRH-1的辅因子进行了研究。 第一部分:Prox1 作为LRH-1 的辅抑制子抑制胆固醇7-α-羟化酶的表达利用酵母双杂交的方法我们筛选得到hLRH-1相互作用蛋白Prox1(prospero-related homeobox transcription factor)。在细胞水平上,证明过表达Prox1能够通过蛋白间相互作用的机制抑制CYP7A1的表达,由此得出了Prox1是hLRH-1特异性辅抑制子的结论。并通过生化实验精确地定位了两者之间的相互作用的区段。报告基因分析的结果表明Prox1 可以分别通过与hLRH-1 的DBD 或LBD 结构域的相互作用而单独行使抑制功能。电泳迁移率改变实验显示Prox1 能够在体外抑制hLRH-1 结合靶基因的能力。上述研究不仅对深入了解LRH-1 转录激活的分子机制以及其体内的生物学功能有重要意义,也为Prox1 体内参与胆汁酸合成代谢途径提供了理论基础。 第二部分:Prox1 通过多个调控元件抑制乙型肝炎病毒HBV 的表达和复制Prox1属于同源异型蛋白家族中的一员,体内具有重要的生物学功能,国际上的研究表明它在淋巴血管建立和眼睛晶状体形成中发挥重要的作用。由于hLRH-1是在研究乙型肝炎病毒(HBV)基因表达调控时首先被克隆,它能够调控HBV ENII/Cp(Enhancer II/Core Promoter of HBV)启动子的活性。本部分的工作对hLRH-1辅抑制子Prox1在HBV基因表达和DNA复制中的作用进行了研究。首先,Prox1通过与hLRH-1相互作用显著抑制HBV ENII/Cp启动子的活性;其次,Prox1可以通过与肝细胞富集的转录因子HNF-1直接相互作用,抑制HNF-1对

论文目录:

引言

第一部分 Prox1 作为LRH-1 的辅抑制子抑制胆固醇7-α-羟化酶的表达

摘要

英文摘要

材料与方法

1.1 实验材料

1.2 主要实验方法

结果

2.1 使用酵母双杂交的方法筛选得到hLRH-1 相互作用蛋白Prox1

2.2 Prox1 与hLRH-1 存在直接的相互作用

2.3 hLRH-1 的DBD 和LBD 结构域负责与Prox1 的相互作用

2.4 Prox1 中的LXXLL 结构域对于介导与hLRH-1 的LBD 区相互作用非常重要,但却和LRH-1 的DBD 区相互作用无关

2.5 Prox1 抑制hLRH-1 靶基因—cyp7a1 的表达

2.6 Prox1 可以分别通过hLRH-1 的DBD 或LBD 行使抑制功能

2.7 Prox1 影响了LRH-1 结合DNA 的能力

讨论

第二部分Prox1 通过多个调控元件抑制乙型肝炎病毒的基因表达和DNA 复制

摘要

英文摘要

材料与方法

1.1 实验材料

1.2 主要实验方法

结果

2.1 Prox1 通过多个病毒调控元件抑制HBV 的基因表达

2.2 Prox1 抑制HNF-1 转录激活能力

2.3 Prox1 和HNF-1 存在直接的相互作用

2.4 HNF-1 的POU 和Homeodomain 负责直接招募Prox1

2.5 Prox1 氨基端的1-120 个氨基酸负责与HNF-1 相互作用

2.6 Prox1 与HNF-1 的相互作用对于抑制Sp1 的转录活性非常重要,但与抑制ENI/Xp 活性无关

2.7 Prox1 抑制乙型肝炎病毒的基因表达和DNA 复制

讨论

总结

缩略名词对照表

参考文献

发表文章目录

致谢

发布时间: 2005-09-09

参考文献

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