论文摘要
目的微卫星不稳定性广泛地应用于肿瘤病的检测，但是应用微卫星技术研究马立克氏病病毒，致瘤型的病毒感染引起基因组变化的还未报道。本实验通过应用马立克氏病病毒的强毒株RBlB感染鸡胚成纤维细胞后，应用鸡4号染色体上20个微卫星标记，旨在发现马立克氏病病毒感染鸡胚成纤维细胞是否引起基因微卫星的改变，研究病毒感染早期阶段的基因组变化，为此病的早期诊断提供线索。方法用鸡4号染色体上20个微卫星标记为引物。做鸡胚成纤维细胞培养，获得含实验和对照的32组样本，提取细胞中的基因组DNA。利用20个微卫星引物，以同源的自体作为对照进行PCR扩增，扩增产物，采用12％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染后观察结果，观察微卫星条带的改变。结果20个微卫星标记，有18个标记发生不同百分率的MSI，18／20（90.00％）表现出微卫星不稳定性阳性，有2个标记没有检测到变化，占微卫星标记2／20（10.00％）。检测到MSI的微卫星位点，表现出不同的百分率，4个位点发生较高的MSI，这4个位点分别为：ABR0622，MCW0174，ADL0266，和ABR0382，MSI发生率分别为37.50％，31.75％，31.75％和31.75％。6个微卫星标记，检测到MSI发生率大于20％，占总微卫星标记的6／20（30.00％）．微卫星标记检测到MSI较集中在15.00％-30.00％之间，此阶段的微卫星标记有8个，占总微卫星标记的8／20（40.00％）。检测到的微卫星标记发生MSI最低为3.13％，这样的位点仅有2个，占微卫星标记比率的2／20（10.00％）。接种马立克氏病病毒的鸡胚成纤维细胞样本有30／32（93.06％）表现出MSI．不同样品MSI统计结果表明11号样品，MSI发生率最高为45.00％。3号样品的发生率也较高为35.00％；有16组样本检测到MSI+，占测样本总量的16／32（50.00％），有14组样本检测到低频的MSI（MSI-L），占总检测样本量的14／32（43.75％），只有两组没有检测到MSI变化表现为MSS，占总检测样本量的2／32（6.25％）．结论发现马立克氏病病毒感染鸡胚成纤维细胞4号染色体上发生微卫星不稳定性．大量的研究发现，肿瘤发生的早期阶段基因组发生广泛的微卫星不稳定性，本研究同样发现微卫星不稳定性，可能为马立克氏病的早期阶段研究提供一些基因不稳定方面的参考，有助于此病早期阶段的研究，和为进一步研究马立克氏病的致病机理，以及用马立克氏病作为模型动物来研究人类淋巴瘤免疫治疗的研究提供参考。