骨髓间充质干细胞对急性胰腺炎损伤修复及其机制的实验研究

论文摘要

本研究根据胰腺微循环的特点,以及对缺血缺氧敏感的特性,通过结扎胰尾处胰腺组织,成功的建立了大鼠急性胰腺损伤模型;观察了同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)经大鼠尾静脉回输移植后,对损伤胰腺的修复作用,并初步探讨了其修复作用的可能机制。结论本论文通过贴壁筛选法和全骨髓培养法,成功分离、培养了大鼠骨髓间充质干细胞,通过对该细胞生物学特性的观察及应用流式细胞检测其表面抗原,证实了所得到的贴壁细胞为骨髓间充质干细胞。应用该方法可以在体外分离、纯化、扩增MSCs,并可获得具有多向分化潜能的纯度较高的活性骨髓MSCs,为下一步研究MSCs作为种子细胞应用于疾病的治疗,提供了充足的MSCs产品和良好的实验基础。同种异体MSCs经大鼠尾静脉回输移植入造模大鼠体内,发现MSCs24小时开始迁徙、定居到受损的胰腺微血管及组织,不仅逐步修复和再生胰腺腺泡和血管,而且还可以修复和再生胰岛结构,使受损的胰腺内、外分泌功能得到逐步的改善。此研究结果,不仅对开展人体临床应用研究打下了良好的基础,而且为急性胰腺损伤的修复和再生提供了可借鉴的技术手段。本论文的实验研究结果提示,同种异体MSCs移植能成功的修复和再生胰岛结构,且胰高血糖素和胰岛素分泌水平趋于正常。这是否能为目前无法根治、且世界范围内发病率极高的糖尿病治疗带来了一线希望呢?

论文目录

• 内容提要
• 英文缩写
• 前言
• 第1章 文献综述
• 1.1 急性胰腺炎的发病机制和内科治疗研究进展
• 1.1.1 急性胰腺炎的发病机制
• 1.1.2 内科治疗研究进展
• 1.2 间充质干细胞的研究进展
• 1.2.1 骨髓间充质干细胞的概念和研究起源
• 1.2.2 骨髓间质干细胞（MSCs）的生物学特征
• 1.2.3 MSCs 的组织分布与分离方法
• 1.2.4 骨髓MSCs 的分化潜能研究
• 1.3 MSCs 在医学上的应用
• 1.3.1 在骨组织修复中的应用
• 1.3.2 在软骨组织修复中的应用
• 1.3.3 在神经组织修复中的应用
• 1.3.4 在肝脏疾病中的应用
• 1.3.5 在胰腺疾病方面的应用
• 第2章 骨髓间充质干细胞的分离及鉴定
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 MSCs 的分离培养
• 2.2.2 MTT 检测MSCs 生长曲线
• 2.2.3 流式细胞术分析MSCs 的细胞周期
• 2.2.4 流式细胞术鉴定MSCs 表型
• 2.2.5 免疫组化检测MSCs 表面MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子的表达
• 2.2.6 MSCs 诱导分化为成骨样细胞
• 2.2.7 MSCs 体外诱导分化为脂肪样细胞
• 2.3 讨论
• 2.4 结论
• 第3章 大鼠胰腺损伤模型的建立
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果
• 3.2.1 外观形态观察
• 3.2.2 组织病理学观察
• 3.3 讨论
• 第4章 骨髓间充质干细胞对胰腺损伤修复作用的研究
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.2 结果
• 4.2.1 外观上观察MSCs 治疗大鼠损伤胰腺的变化
• 4.2.2 组织病理学变化
• 4.2.3 血清中血淀粉酶与脂肪酶含量的测定
• 4.2.4 胰高血糖素和胰岛素的免疫组化表达
• 4.3 讨论
• 4.4 结论
• 第5章 骨髓间充质干细胞对胰腺损伤修复机制的研究
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 方法
• 5.2 结果
• 5.2.1 DAPI 标记MSCs
• 5.2.2 DAPI 标记的MSCs 在模型大鼠体内移行及定位
• 5.2.3 免疫组化检测
• 5.2.4 PCR 鉴定模型大鼠胰腺Sry 基因
• 5.2.5 MSCs 在模型大鼠体内的胰岛样细胞的转化
• 5.3 讨论
• 5.4 结论
• 第6章 结论
• 参考文献
• 攻读博士学位期间发表论文
• 致谢
• 中文摘要
• ABSTRACT