虎源和狮源H5N1亚型流感病毒进化分析与HA基因重组犬2型腺病毒构建研究

论文摘要

自2003年以来,H5N1禽流感(AI)在亚洲的大面积暴发已导致近亿只禽类感染死亡或被捕杀,并跨越种间障碍导致109人死亡。这些事件让人们担心H5N1AIV可能会进化成为引发流感大流行的病毒。2002年我们从发病死亡虎中分离到1株H5N1 AIV,这是首次发现H5N1 AIV能够自然感染除人以外的哺乳动物并且导致其发病死亡。在进一步的虎和狮AI感染情况调查中分离获得14株H5N1 AIV,对虎源和狮源流感病毒的生物学特性和基因进化进行了研究:人工感染实验表明所分离病毒对鸡、小白鼠和家猫均具有高致病性;全基因序列测定表明所分离病毒与H5N1亚型AIV高度同源(96%～100%),虎源和狮源流感病毒各基因节片具有一系列H5N1 AIV特征性遗传位点;受体结合特性检测表明15株病毒均保持着与AIV受体结合的特性,虎气管流感病毒受体以AIV受体类型为主。以犬2型腺病毒为载体,构建了表达流感病毒HA蛋白的重组活病毒,用其免疫猫可以诱导产生效价为1:8～1:16的中和抗体。这为哺乳动物H5N1亚型流感病毒重组活载体疫苗的研究提供了理论与技术基础。

论文目录

• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 H5N1 禽流感病毒病原特点与进化
• 1 A 型流感病毒病原学特点
• 2 禽流感流行病学特点
• 3 H5N1 亚型禽流感流行现状
• 4 H5N1 亚型禽流感病毒的进化
• 5 结语
• 第二章 禽流感病毒致病性分子基础的研究进展
• 1 禽流感病理学
• 2 发病机理
• 3 禽流感病毒致病性划分依据
• 4 病毒结构蛋白与病毒致病性的关系
• 5 流感病毒致病性与流感病毒诱导细胞凋亡的关系
• 6 结语
• 第三章 A 型流感病毒宿主特异性的分子基础
• 1 流感病毒的受体
• 2 血凝素与流感病毒宿主特异性的关系
• 3 1918“西班牙流感”病毒的宿主特异性
• 4 H5N1 高致病性禽流感病毒种间传播的分子机制
• 5 NA 与流感病毒宿主范围的关系
• 6 结语
• 第四章 高致病性禽流感疫苗的研究进展
• 1 灭活疫苗
• 2 亚单位疫苗
• 3 基因疫苗
• 4 基因重组活病毒疫苗
• 5 结语
• 第二篇 研究内容
• 第一章 虎源和狮源H5N1 亚型流感病毒分离与圈养虎感染情况调查
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 2.1 现地调查结果
• 2.2 RT-PCR 检测结果
• 2.3 病毒分离
• 2.4 病毒的电子显微镜观察
• 2.5 血凝特性试验
• 2.6 HA 亚型的鉴定结果
• 2.7 NA 亚型鉴定
• 2.8 HI 与SN 抗体检测结果
• 2.9 虎源与狮源禽流感时空分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 虎源和狮源H5N1 亚型流感病毒致病性研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 2.1 细胞感染范围试验
• 2.2 TCID50 测定结果
• 2.3 鸡静脉接种致病指数测定结果
• 2.4 LD50 测定结果
• 2.5 家猫人工感染实验结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 虎源和狮源流感病毒进化地位与遗传特点研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 2.1 PCR 鉴定结果
• 2.2 虎源和狮源流感病毒各基因节片来源分析
• 2.3 虎源和狮源流感病毒进化地位分析
• 2.4 虎源和狮源流感病毒遗传特点研究
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 虎源流感病毒受体结合特性测定与虎呼吸道流感病毒受体类型鉴定
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 2.1 虎源H5N1 亚型流感病毒受体结合特性测定
• 2.2 虎的呼吸道上皮细胞流感病毒受体类型鉴定
• 3 讨论
• 4 小结
• 第五章 重组虎源H5N1 流感病毒HA 基因犬2 型腺病毒构建与实验免疫研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 2.1 HA 基因重组载体的构建
• 2.2 pCAV-2-HA 重组质粒的构建与鉴定
• 2.3 重组CAV-2-HA 基因组转染DK 细胞
• 2.4 重组病毒CAV-2-HA 的鉴定
• 2.5 CAV-2-HA 对猫的安全性试验结果
• 2.6 免疫犬的外周血淋巴细胞转化试验检测结果
• 2.7 体液免疫水平检测结果
• 2.8 重组病毒CAV-2-HA 的遗传稳定性鉴定
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 中文摘要
• 英文摘要
• 攻读博士学位期间发表的学术论文及其它成果
• 致谢
• 导师及作者简介