内毒素耐受在大鼠脓毒症致多脏器功能损伤中的作用和NF-κB的活性变化

论文摘要

【目的】内毒素耐受（endotoxin tolerance,ET）是指预先接触小剂量的内毒素（lipopolysaccharide,LPS）后,机体对随后的大剂量LPS刺激表现为低反应性。盲肠结扎和穿刺（cecal ligation and puncture,CLP）模型诱导的混合菌感染能复制出临床脓毒性休克和多脏器功能障碍综合征（multiple organ dysfunctionsyndrome,MODS）的病理特征。本研究旨在观察内毒素耐受对CLP诱导的多脏器功能损伤是否具有保护作用,并进一步探讨其保护作用是否与NF-κB相关。【方法】雄性SD大鼠行盲肠结扎和穿刺术制作混合菌感染的脓毒症模型,采用连续4天腹腔注射LPS（0.6mg/kg/天）建立内毒素耐受大鼠模型。大鼠经3%戊巴比妥钠（40-50 mg/kg）腹腔麻醉后随机分为3组:假手术组（sham组）,行剖腹术但不结扎和穿刺;CLP组,每日腹腔注射生理盐水1ml连续4天,第5天行盲肠结扎和穿刺术;ET+CLP组,LPS 0.6mg/kg/d稀释至1ml腹腔注射每日一次连续4天,第5天行盲肠结扎和穿刺术。每组大鼠在五个时间点【CLP前（Oh）,CLP后1,3,6,18h】采集血标本和组织标本后被处死,标本用于生化检测、组织病理学和NF-κB的活性检测。在另一个单独实验中,大鼠被随机分为二组:CLP组和ET+CLP组,每组10只。用于观察大鼠CLP术后一周的生存率。【结果】1,内毒素耐受组CLP后大鼠的生存率显著高于对照组（CLP组大鼠24h生存率为40%,一周的生存率为0%;ET+CLP组大鼠24h生存率为80%,一周的生存率为40%,log rank检验p=0.021）;2,成功建立CLP诱导的混合菌感染脓毒症模型,其可以引起大鼠多脏器功能损伤,在术后18h更为明显,主要表现为肝功能指标（TBIL、DBIL、ALT和AST）以及肾功能指标（BUN和Cr）明显增高,而内毒素耐受组的肝。肾功能损害明显减轻（CLP组术后18h血清TBIL,DBIL,ALT,AST,BUN和Cr的水平分别为0.85±0.32mg/dL,0.57±0.23 mg/dL,163.1±61.1u/L,310.8±120.5 u/L,38.1±12.5 mg/dL,0.51±0.10 mg/dL;ET+CLP组为0.29±0.08mg/dL,0.21±0.05mg/dL,95.3±20.1u/L,168.3±30.4u/L,22.5±5.9mg/dL,0.36±0.08mg/dL,p＜0.05）;3,组织病理学显示CLP后脏器组织有明显的炎症细胞浸润、细胞变性以及血管充血等改变,病理改变以肺脏、肝脏和。肾脏组织为明显,而内毒素耐受组相应的组织病理学损害明显较轻;4,与sham组比较,CLP组术后血清TNF-α、IL-6和IL-10浓度明显增高,血清TNF-α峰值位于术后6h（305.3±67.6 pg/mL）,而血清IL-6和IL-10峰值位于术后18h（201.5±54.6 pg/mL和95.7±38.5pg/mL）。内毒素耐受组血清细胞因子的水平明显较低（术后6h TNF-α浓度为37.3±11.5pg/mL,术后18h IL-6和IL-10浓度为84.2±38.5pg/mL和35.2±11.8pg/mL,p＜0.05）;5,CLP组大鼠术后肺脏NF-κB活性迅速增强,并于术后3h达到峰值,而内毒素耐受组术后3h和6h的NF-κB活性明显低于CLP组（p＜0.05）。【结论】本研究表明内毒素耐受对脓毒症诱导的多脏器功能损伤具有保护作用,其保护作用的机制部分与NF-κB的活性下调和细胞因子的产生减少有关,提示内毒素耐受对于脓毒症具有一定的潜在保护作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 内毒素耐受在脓毒症致多脏器功能损伤中的保护作用
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分 内毒素耐受对脓毒症大鼠肺脏NF-κB活性的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 英文缩写
• 致谢
• 综述 脓毒症治疗的进展
• 参考文献