喹烯酮在鲤体内的药代动力学及残留研究

论文摘要

喹烯酮为喹噁啉类饲料添加药物,对猪、鸡等动物具有抗病促生长作用。水产养殖业是重要的食品生产行业之一。喹烯酮对水产动物具有抗菌促生长,提高成活率的作用,因而具有应用于水产养殖业的潜能。本课题在建立鲤血浆、组织中喹烯酮及其两种主要代谢产物定量分析方法的基础上,系统开展了喹烯酮在鲤体内的药动学和残留研究,阐明了喹烯酮存鲤体内吸收与分布规律,确定喹烯酮在鲤体内的残留标识物和靶组织,建立鲤混饲喹烯酮的休药期标准,为喹烯酮在水产动物的应用及其食品安全性控制提供科学依据。采用液-液萃取与固相萃取技术建立了喹烯酮及其主要代谢物在鲤血浆和组织中的高效液相色谱法,并对方法准确度、精密度、最低定量限及线性等进行了系统考察。结果表明,喹烯酮及其主要代谢物在鲤血浆中的定量限均为8μg/L,当血浆中喹烯酮、脱二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧酸添加的浓度为8,16,40μg/L时,回收率为74.92～87.71%,日间变异系数为7.71～11.24%。线性方程分别为y=3.5515x+1.7055（r=0.9997）,y=2.2042x+80.166（r=0.9993）,y=3.1988x-7.4783（r=0.9997）。由此可见,准确度和精密度都符合定量分析方法的要求,在所选定的浓度范围内,线性较好。喹烯酮和脱二氧喹烯酮在鲤肌肉中的定量限为4μg/kg,在鱼皮中的定量限为10μg/kg,在鱼肝中的定量限为20μg/kg。当肌肉、鱼皮和鱼肝中分别添加4,8,16μg/kg,10,20,40μg/kg,20,40,80μg/kg时,回收率为74.06～86.31%。日间变异系数为6.84～14.84%。线性方程分别为喹烯酮在鱼肉:y=5.2274x-9.5567（r=0.9996）,喹烯酮在鱼皮:y=2.2788x-8.8477（r=0.9993）,喹烯酮在鱼肝:y=1.0503x+7.1496（r=0.9992）;脱二氧喹烯酮在鱼肉:y=3.8933x-25.092（r=0.9993）,脱二氧喹烯酮在鱼皮:y=1.7261x-16.683（r=0.9992）,脱二氧喹烯酮在鱼肝:y=0.8662x-5.3659（r=0.9992）。借鉴本实验室袁宗辉等所建立的3-甲基喹噁啉-2-羧酸在猪、鸡和鱼可食性组织中高效液相色谱法的国家标准,建立的3-甲基喹噁啉-2-羧酸在鲤的肌肉、鱼皮和肝脏中的分析方法的定量限分别为4μg/kg、10μg/kg和10μg/kg,当肌肉、鱼皮和鱼肝中分别添加4,8,20μg/kg,10,20,50μg/kg,10,20,50μg/kg时,回收率为73.77～78.54%。日间变异系数为6.28～11.19%。线性方程分别为y=5.6176x-16.201（r=0.9996）.y=1.5754x+5.0518（r=0.999）,y=1.7735x-14.638（r=0.9995）.由此可见,准确度和精密度符合定量分析方法的要求,在所选定的浓度范围内,线性较好。将体重约0.4～0.5kg的健康鲤320尾按体重分成两组,每组160尾,一组单次静注喹烯酮2.5mg/kg b.w,另一组口服喹烯酮200mg/kg b.w.。给药后分别于不同时间采集血样,样品处理后HPLC检测。两种给药方式下血浆中均只检出原形药物。鲤静注2.5mg/kg b.w.,药时数据符合无吸收二室开放模型。分布半衰期t1/2α为0.32h,消除半衰期t1/2β为11.33h,药时曲线下面积AUC为9.65（μg/mL）·h,表明喹烯酮在鲤体内分布迅速,消除较慢。鲤口灌200mg/kg b.w.,药时数据符合有吸收一室开放模型,吸收半衰期t1/2α为2.53h,消除半衰期t1/2e为9.90h,药时曲线下面积AUC为1.72（μg/mL）·h,达峰浓度Cmax为0.08μg/mL,生物利用度F为0.23%,表明鲤口灌喹烯酮后吸收较快,消除较慢,生物利用度低。将健康鲤190尾连续饲喂混有75mg/kg喹烯酮的饲料12周后,分别于停药后4h、12h、24h、48h、72h、5d、7d、10d、14d、21d、28d、35d采样,各采集点随机取样10尾。剖杀后立即采集皮、肌肉、肝脏,后样品处理用HPLC检测喹烯酮及其代谢产物在肌肉、皮肤、肝脏中的残留量。结果表明,停药后4h、48h和72h,喹烯酮在鲤的皮肤、肝脏和肌肉中的含量已低于定量限;停药后12h、24h和48h,脱二氧喹烯酮在鲤的肝脏、皮肤和肌肉中的含量即已低于定量限;停药12h、7d和10d后,3-甲基喹噁啉-2-羧酸在皮肤、肌肉和肝脏中的含量即已低于定量限。本研究结果表明,喹烯酮及其主要代谢物在鲤所有可食性组织中的消除速度以3-甲基喹噁啉-2-羧酸在肝脏中的半衰期最长,故确定喹烯酮在鲤体内的靶组织为肝脏,残留标识物为3-甲基喹噁啉-2-羧酸。肝脏中,MQCA浓度在停药后4h为0.045μg/g,停药后21d即降到LOD以下,其消除半衰期为3.56d。根据毒理学研究,计算MQCA在肝脏中的MRL为1.8μg/g。本研究表明停药后4h肝脏中MQCA含量就低于1.8μg/g,据此确定喹烯酮在鲤体内的休药期为零天。本文所建立的分析方法灵敏度高,检测周期较短,检测费用较低,同时可作为检测其他动物的参考以及可作检测其它喹噁啉类药物的参考。本课题首次阐明了在口灌和静注两种给药方式下,喹烯酮在鲤体内的药动学特征。首次阐明在连续饲喂12周下,喹烯酮在鲤体内的分布和残留消除规律,提出了喹烯酮在鲤的休药期标准,并建立了喹烯酮及具代谢物的残留监控技术,为喹烯酮在鲤的安全性评价及其合理使用提供了科学依据,将进一步促进水产养殖和食品安全事业的蓬勃发展。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语表
• 1 前言
• 1.1 喹烯酮药理学与毒理学特点
• 1.2 喹烯酮药代动力学和残留研究进展
• 1.3 研究内容、目标和目的意义
• 2 材料与方法
• 2.1 药品与试剂
• 2.1.1 药品
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 溶液的配制
• 2.2 饲料
• 2.3 主要仪器
• 2.4 血浆和可食性组织中定量分析方法研究
• 2.4.1 色谱条件
• 2.4.2 样品处理方法
• 2.4.3 检测限与定量限
• 2.4.4 标准曲线和工作曲线
• 2.4.5 准确度和精密度测定
• 2.4.6 稳定性研究
• 2.5 药代动力学试验方案
• 2.6 残留消除试验方案
• 2.7 数据处理
• 2.7.1 样品定量
• 2.7.2 药动学数据处理
• 2.7.3 残留消除常数的计算
• 2.7.4 休药期的确定
• 3 结果
• 3.1 喹烯酮在鲤血浆和组织中定量分析方法学结果
• 3.1.1 方法专属性
• 3.1.2 检测限与定量限
• 3.1.3 准确度和精密度
• 3.1.4 标准曲线
• 3.1.5 工作曲线
• 3.1.6 喹烯酮及其主要代谢物的稳定性
• 3.2 喹烯酮在鲤体内的药物动力学特征
• 3.2.1 静注药物动力学特征
• 3.2.2 口服药物动力学特征
• 3.3 喹烯酮在鲤体的残留消除特征
• 3.3.1 喹烯酮
• 3.3.2 脱二氧喹烯酮
• 3.3.3 3-甲基喹噁啉-2-羧酸
• 3.3.4 休药期的计算
• 4 讨论
• 4.1 定量方法学
• 4.2 喹烯酮药代动力学研究
• 4.3 喹烯酮残留消除特点
• 5 小结
• 文献综述:国内外渔药使用与水产品安全
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介
• 附录
• 附录1:定量分析方法学原始数据
• 附录2:药代动力学试验原始数据
• 附录3:残留试验原始数据
• 附录4:空白样品及其空白样品加药色谱图
• 附录5:实际样品色谱图
• 附录6:答辩主要问题的回答