慈竹组培快繁体系的研究

论文摘要

慈竹（Neosinocalmus affinis （Rendle） Keng f.）是我国西南地区最普遍的篾用竹种之一,其节间长,材质柔软,劈篾启层性能好,纤维素含量多,纤维长径比较大,分子聚合度相对较高,是很好的造纸材料,具有很大的经济价值、生态价值和社会价值。本文主要从慈竹种胚到愈伤途径和种胚到丛生芽途径进行研究。一是先诱导愈伤组织,再诱导芽分化,即器官发生途径。二是不通过诱导愈伤组织,直接由种胚先形成芽,然后再诱导丛芽,由丛芽直接发育成小植株。以慈竹种胚为外植体,主要围绕外植体灭菌、愈伤诱导、愈伤增殖、丛生芽诱导、丛生芽增殖、试管苗生根、试管苗出瓶炼苗移栽等几方面进行,集中研究不同灭菌方法的选择、不同基本培养基类型、不同激素配比和用量的选择等多方面相关问题。试验中的培养基方案采用自由组合、正交设计,数据采用DPS软件分析。获得了如下主要实验结果:1.慈竹外植体最佳的灭菌方法是:0.2%NaOCL浸泡15min→无菌水冲洗8次→0.1%KMnO4浸泡12h→无菌水冲洗8次→0.1%HgCl2浸泡30min→无菌水冲洗8次→吸干水分→接种。2.影响慈竹种胚愈伤诱导的主要因素有:基本培养基、细胞分裂素2,4-D、KT。慈竹胚愈伤诱导的最适宜培养基是MS+2,4-D 5.0 mg/l +KT 0.4mg/l +蔗糖30g/L +琼脂8g/L,pH5.8。3.影响慈竹种胚愈伤增殖的主要因素有:基本培养基、细胞分裂素2,4-D、NAA、6-BA。慈竹种胚愈伤增殖的最适宜培养基是MS+2,4-D 2.0 mg/l +NAA 0.5mg/l +6-BA0.1mg/l +蔗糖30g/L +琼脂8g/L,pH5.8。4.影响慈竹丛芽诱导的主要因素有:基本培养基、细胞分裂素6-BA、生长素NAA。慈竹丛芽诱导的最适宜培养基是MS+BA4.0 mg/l +NAA0.4mg/l +蔗糖30g/L +琼脂8g/L,pH5.8。5.影响慈竹丛生芽继代增殖的主要因素有:基本培养基、细胞分裂素6-BA、KT,生长素NAA。其中基本培养基以MS,细胞分裂素6-BA以4.0 mg/l、生长素NAA0.5 mg/l有利于丛生芽的增殖。慈竹丛生芽继代增殖最适宜培养基配方是3/4MS +BA4.0 mg/l +NAA0.3 mg/l + KT0.3 mg/l +蔗糖30g/L +琼脂8g/L。pH5.8。6.影响慈竹生根的主要因素有:基本培养基,生长素NAA、IBA、6-BA。慈竹丛生芽生根最适宜培养基配方是1/2MS+IBA1.0 mg/l+6-BA0.5 mg/l +NAA2.5 mg/l+蔗糖20g/L +琼脂8g/L。pH5.8。7.移栽时,慈竹小苗先在室内炼苗3～5天,再进行移栽,试验发现蛭石是较好移栽基质,成活率可达70%以上。且小苗生长健壮。综上所述,本文一方面研究慈竹组培快繁各阶段的主要影响因素和最佳培养基配方,筛选出最优技术参数组合,建立慈竹最优再生体系,进一步扩大慈竹外植体选择范围,提高丛生芽增殖系数,进而提高慈竹商业化生产效率,解决目前市场上慈竹种苗短缺的问题,为慈竹专业化育苗提供技术支持。另一方面获得胚性愈伤组织,进而为竹类基因工程育种后续阶段提供适宜的材料,使此次实验在育种方面又具有了另一重要的意义。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 慈竹简介
• 1.2 竹类植物组织培养概述
• 1.3 慈竹组织培养过程中的影响因子
• 1.3.1 外植体材料
• 1.3.2 培养条件
• 1.3.3 植物生长调节剂
• 2 引言
• 2.1 本课题的研究意义
• 2.2 本研究的内容、目标
• 2.2.1 研究内容
• 2.2.2 研究目标
• 2.3 本研究采用的技术路线
• 3 材料和方法
• 3.1 试验材料
• 3.2 主要仪器设备和试剂
• 3.2.1 主要仪器设备
• 3.2.2 主要试剂
• 3.2.3 有关试剂和培养基的配制
• 3.3 试验方法
• 3.3.1 种胚消毒方法的筛选
• 3.3.2 继代过程中污染材料的二次消毒
• 3.3.3 筛选种胚愈伤诱导培养
• 3.3.4 不同植物激素对慈竹种胚愈伤增殖的影响
• 3.3.5 不同植物激素对慈竹种胚愈伤分化的影响
• 3.3.6 筛选诱导丛生芽培养
• 3.3.7 丛生芽继代增殖培养基设计方案
• 3.3.8 再生植株诱导生根
• 3.3.9 慈竹试管苗的炼苗及移栽
• 3.3.10 数据计算方法与分析工具
• 4 结果与分析
• 4.1 外植体无菌体系的建立
• 4.1.1 不同处理对污染率与成活率的影响
• 4.1.2 继代培养过程中污染材料的二次灭菌
• 4.2 愈伤组织的诱导
• 4.2.1 不同浓度2，4-D 对种胚诱导的影响
• 4.2.2 不同浓度 KT 对慈竹种胚诱导的影响
• 4.3 不同激素对种胚愈伤组织增殖的影响
• 4.4 愈伤组织的分化
• 4.4.1 不同浓度6-BA对慈竹种胚愈伤分化的影响
• 4.4.2 不同浓度 NAA 对慈竹种胚分化率的影响
• 4.5 不同激素组合对丛生芽诱导的影响
• 4.5.1 不同浓度6-BA对丛生芽诱导的影响
• 4.5.2 不同浓度 NAA 对丛生芽诱导的影响
• 4.6 不同激素组合对丛生芽增殖的影响
• 4.7 再生植株诱导生根
• 4.8 生根组培苗的炼苗及移栽
• 5 结论与讨论
• 5.1 结论
• 5.1.1 慈竹组织培养条件
• 5.1.2 外植体的选取
• 5.1.3 外植体无菌体系的建立
• 5.1.4 愈伤诱导的最佳培养基
• 5.1.5 愈伤增殖的最佳培养基
• 5.1.6 丛生芽诱导的最佳培养基
• 5.1.7 丛生芽继代增殖培养
• 5.1.8 生根培养
• 5.1.9 试管苗移栽基质及养护管理
• 5.2 讨论
• 5.2.1 外植体的选择和消毒
• 5.2.2 慈竹种胚愈伤诱导
• 5.2.3 慈竹种胚丛生芽阶段
• 5.2.4 后续的工作计划
• 参考文献
• 附图
• 附录
• 致谢
• 个人简介
• 在读期间发表的论文