大鼠甲醛炎性痛过程中脊髓后角诱导型一氧化氮合酶阳性细胞的构成

论文摘要

目的:一氧化氮（nitric oxide,NO）是调节疼痛的重要介质,NO合酶（NO synthase,NOS）是生成NO的限速酶。已有证据表明,外周伤害性刺激可诱导脊髓NOS表达增多,产生大量NO参与疼痛的产生与维持。我室既往应用免疫组化和NADPH-d等方法研究表明,甲醛炎性痛时,脊髓后角nNOS和iNOS表达增多,进一步证实了NO在外周炎性痛和痛过敏的产生和维持中的作用。但是,这些NOS阳性细胞的细胞构成尚不清楚。越来越多的证据表明,脊髓胶质细胞的激活与病理性痛和痛觉过敏的产生和维持有密切关系。例如,可逆性胶质细胞代谢抑制剂可以抑制许多疼痛模型中的自发痛和痛觉过敏的产生和维持。在许多类型的神经病理性痛,如脊神经损伤（冷冻,结扎）、坐骨神经结扎等神经病理性痛,以及甲醛、酵母多糖等引起的炎性痛过程中,均可见脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞增殖活化。这些增殖活化的胶质细胞可释放多种化学物质和细胞因子促进痛和痛觉过敏的产生和维持。由此可见,除神经元以外,脊髓胶质细胞可能也参与甲醛炎性痛时脊髓NOS表达的上调。因此,本实验采用免疫组织化学双重标记GFAP（星形胶质细胞特异性标记蛋白）和iNOS、以及连续切片免疫组化对比观察OX42（小胶质细胞特异性标记蛋白）和iNOS的表达等方法,观察大鼠足底注射甲醛引起的急性炎性痛过程中,脊髓后角星形胶质细胞和小胶质细胞在脊髓iNOS表达增多中的作用,以期进一步阐明脊髓胶质细胞和NO在外周炎症性痛和痛过敏中的作用。方法:将30只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为生理盐水组和甲醛组,分别足底注射生理盐水和甲醛,每组按足底注射后取材时间的不同又分为1 h、24 h和48 h组（n=5）。各组于相应时间点断头取腰5脊髓节段（L5）,石蜡切片上行iNOS/GFAP免疫组化双重染色。另取30只大鼠随机分为生理盐水组和甲醛组,每组按足底注射后取材时间的不同分为1 h、1 d、3 d、7 d和14 d组。各组于相应时间点灌注取材,冰冻连续切片,免疫组化对比观察L5脊髓后角OX42和iNOS的表达。对以上各组动物均于取材前行相应的行为学观测:1 h组动物于取材前行痛反应评分;其他组动物于取材前测定热辐射缩足反射潜伏期和机械缩足反射阈值。结果:大鼠右后足底注射5%甲醛后,注射足出现典型的双向性自发缩足反应,持续1 h以上。注射部位热辐射缩足潜伏期延长和机械刺激缩足反射阈值升高,而非注射足相应部位的热辐射缩足潜伏期缩短和机械刺激缩足反射阈值降低。注射后甲醛后1 h,24 h和48 h,在注射足同侧的L5脊髓后角和中央管周围均可观察到少量iNOS/GFAP双标细胞散在分布,各时间点之间无显著差异。连续切片免疫组化对比观察发现,足底注射甲醛后,L5脊髓后角iNOS与OX42阳性细胞从形态、分布、表达时相上均有显著差异,并未呈现明显一致的趋势,iNOS与OX42的表达没有显著的相关性。结论:大鼠足底注射甲醛后,注射部位对热和机械刺激感觉减退,而非注射足相应部位出现痛觉过敏现象。足底注射甲醛诱导脊髓后角iNOS表达上调的过程中,脊髓胶质细胞发挥一定的作用,但不起主要作用;脊髓后角表达上调的iNOS可能主要由神经元所介导。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 大鼠甲醛炎性痛过程中脊髓后角诱导型一氧化氮合酶阳性细胞的构成
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 胶质细胞参与疼痛调节的作用机制
• 致谢
• 个人简历