CIK细胞对ZK-75-1乳腺癌细胞株的诱导调亡作用及其机制的探讨

论文摘要

目的:研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine-induced kill cells,CIK）对ZK-75-1乳腺癌细胞株的抗增殖及诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。 方法:应用MTT法检测CIK细胞对ZK-75-1乳腺癌细胞株的抗增殖作用的影响及细胞毒活性;通过倒置显微镜、HE染色、透射电镜观察凋亡细胞的形态学改变;应用（TdT-mediated dUTP nick end labeling）TUNEL法检测CIK细胞诱导凋亡的情况;通过免疫细胞化学法测定p16、p53、C-myc、Bcl-2、Bax的阳性表达率,深入研究CIK细胞对ZK-75-1乳腺癌细胞株凋亡相关基因蛋白表达的影响。 结果:（1）MTT比色法结果表明:随着CIK细胞与乳腺癌细胞效靶比增加及作用时间延长,抑制率明显增强。同一作用时间不同效靶比之间有显著性差异（P<0.01）,不同作用时间同一效靶比之间也有显著性差异（P<0.01）;（2）倒置显微镜观察:CIK细胞向靶细胞方向靠近,形成典型的玫瑰花环状改变。肿瘤细胞胞浆出现颗粒状物,有的CIK细胞进入肿瘤细胞胞浆或胞核内,有的肿瘤细胞只剩下颗粒状碎片,对照组乳腺癌细胞生长良好;（3）HE染色:CIK实验组同倒置显微镜下所见;（4）透射电镜观察结果:在效靶细胞共育4小时和12小时后,多数靶细胞内可见到染色质浓缩,胞浆内空泡出现,核仁分解,凋亡小体形成。在效靶细胞共育24小时后,绝大多数靶细胞死亡,死亡方式有细胞凋亡及溶解坏死两种;（5）TUNEL法检测结果:对照组呈不染或均匀淡蓝色,实验组凋亡细胞缩小,核或核周呈深蓝色。CIK实验组4-12小时凋亡率上调,12-24小时凋亡率下降。CIK实验组凋亡率与对照组相比有显著性差异（P<0.01）（6）免疫细胞化学染色结果表明:CIK实验组p16、p53、C-myc、Bcl-2蛋白随作用时间延长表达均下降,Bax蛋白表达上调,与对照组相比均有显著性差异（P<0.01）

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 药物及试剂
• 1.1.2 主要仪器
• 1.1.3 实验细胞
• 1.2 方法
• 1.2.1 体外细胞培养
• 1.2.2 检测ZK-75-1乳腺痛细胞株存活率
• 1.2.3 效应细胞制备
• 1.2.4 MTT法体外细胞毒测定
• 1.2.5 细胞凋亡检测
• 1.2.6 免疫细胞化学染色
• 1.3 统计学处理
• 第二章 结果
• 2.1 MTT法检测CIK细胞对ZK-75-1乳腺癌细胞株的抗增殖及细胞毒作用
• 2.2 ZK-75-1乳腺癌细胞的形态学改变
• 2.3 TUNEL染色法检测CIK细胞对ZK-75-1乳腺癌细胞诱导凋亡作用
• 2.4 免疫细胞化学法检测凋亡相关基因蛋白表达水平
• 第三章 讨论
• 3.1 CIK细胞对ZK-75-1乳腺癌细胞株的抑制作用
• 3.2 CIK细胞诱导ZK-75-1乳腺癌细胞株的凋亡作用
• 3.3 CIK细胞诱导ZK-75-1乳腺癌细胞株凋亡作用机制的探讨
• 结论
• 致谢
• 附图
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献