论文题目: pEgr-IFNγ-Endostatin双基因-放射治疗的抑瘤效应及机制的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 放射医学
作者: 杨巍
导师: 李修义
关键词: 干扰素,内皮抑素,基因放射治疗,肺癌细胞,射线
文献来源: 吉林大学
发表年度: 2005
论文摘要: 基因-放射治疗是一种新的癌症治疗模式,它将基因治疗与放射治疗有机结合,发挥协同作用,对于实体肿瘤的治疗具有良好的应用前景。本研究根据Egr-1 启动子的辐射诱导特性,构建了辐射诱导双基因共表达质粒pEgr-IFNγ-Endostatin,比较了双基因-放射治疗方案与单基因-放射治疗方案的体内抑瘤效应并探讨其机理。结果表明,pEgr-IFNγ-Endostatin基因-放射治疗的体内抑瘤效应明显优于pEgr-IFNγ或pEgr-Endostatin 单基因-放射治疗,其抑瘤效应机制可能与联合发挥IFNγ的免疫调节作用、Endostatin 的抗肿瘤血管生成作用以及射线对肿瘤的直接杀伤作用有关。本研究为进一步提高基因-放射治疗效果开辟了新的途径,为基因-放射治疗的临床应用提供理论和实验依据。
论文目录:
英文缩写
第一章 绪论
1 基因治疗研究进展
1.1 基因治疗发展概述
1.2 基因治疗的研究现状
1.3 基因治疗的基因导入系统
1.4 基因治疗中有待解决的关键问题
1.5 基因治疗的应用前景
2 肿瘤基因治疗研究进展
2.1 肿瘤基因治疗概述
2.2 肿瘤的免疫基因治疗
2.3 肿瘤抗血管生成基因治疗
2.4 肿瘤的联合基因治疗
2.5 肿瘤基因-放射治疗
3 内皮抑素和γ干扰素的抗肿瘤作用
3.1 内皮抑素
3.2 γ干扰素
4 立题依据
第二章 材料和方法
1 主要试剂及器材
1.1 试剂
1.2 器材
2 仪器
3 质粒与菌种
4 细胞株
5 实验动物
6 照射条件
7 表达载体构建
7.1 转化
7.2 质粒的提取
7.3 琼脂糖凝胶电泳
7.4 限制性内切酶酶切反应
7.5 DNA 片段回收
7.6 连接反应
7.7 重组子的鉴定
8 目的基因的表达
8.1 转染
8.2 ELISA 检测细胞上清中IFNγ和Endostatin
9 荷瘤动物模型的建立
9.1 接种及分组
9.2 肿瘤测量
10 免疫学指标检测
10.1 睥脏单细胞悬液的制备
10.2 睥细胞特异性CTL 细胞毒活性检测
10.3 睥脏NK 细胞毒活性检测
10.4 腹腔巨噬细胞(Mφ)TNF-α的诱生及活性检测
11 肿瘤胞浆蛋白的提取
12 免疫组织化学染色检测肿瘤间质微血管密度
12.1 载玻片的处理
12.2 石蜡切片、HE 染色
12.3 免疫组织化学染色
13 统计学方法
第三章 实验结果
1 重组质粒的构建
1.1 重组单基因表达质粒pEgr-Endostatin 的构建
1.2 重组单基因表达质粒pEgr-IFNγ的构建
1.3 重组双基因共表达质粒pEgr-IFNγ-Endostatin 的构建
2 重组双基因共表达质粒PEGR-IFNγ-ENDOSTATIN在体外培养的LEWIS肺癌细胞中的辐射诱导表达
2.1 不同剂量X 射线照射重组质粒转染的Lewis 肺癌细胞上清中IFNγ和Endostatin 表达水平变化
2.2 2Gy X射线照射重组质粒转染的Lewis肺癌细胞上清中IFNγ和Endostatin表达时程变化
3 IFNγ和ENDOSTATIN 双基因-放射治疗的体内抑瘤效应探讨
3.1 单次双基因-放射治疗的体内抑瘤作用
3.2 多次双基因-放射治疗的体内抑瘤作用
4 IFNγ和ENDOSTATIN 双基因-放射治疗的抑瘤效应机制探讨
4.1 双基因-放射治疗抑瘤效应免疫学机制
4.2 基因-放射治疗后瘤内IFNγ和Endostatin 的表达
4.3 免疫组化法检测基因-放射治疗后肿瘤间质微血管密度
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
作者简介
致谢
中文摘要
ABSTRACT
发布时间: 2005-08-26
参考文献
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