论文摘要
江鳕(Lota Lota)属鳕形目,鳕科,江鳕属。俗称:山鳕,山鲶鱼,鲶鱼。是生活在北极淡水区的冷水性鱼类,为鳕科中的唯一淡水种类,是我国中、小经济鱼类之一。本试验以江鳕为研究材料,利用磁珠富集法筛选获得微卫星序列,根据微卫星序列设计引物,利用设计好的引物分析黑龙江地区三个群体:镜泊湖群体,乌苏里江群体和黑龙江群体的遗传多样性。微卫星标记筛选鉴定:江鳕基因组DNA用限制性内切酶进行酶切,经蔗糖密度梯度离心后选出500～1000bp大小的片断连接到制备好的Brown接头上,过柱去除多余接头,一次PCR创建基因组DNA文库。然后利用磁珠富集法将含有微卫星的DNA片段挑选出来,二次PCR后的产物与载体连接。将连接后的产物与制备好的感受态细胞的进行转化,利用菌落PCR检测插入情况达70.0%。以放射性同位素标记的探针对其中1650个克隆进行杂交筛选,阳性克隆率为42.55%(702个)。送出测序150个,得到145个(96.67%)含有微卫星序列的克隆。其中以CA/GT为单位的重复序列占了82.46%,以AG/TC为单位的重复序列占12.41%,以ACA/TGT为单位的重复序列占5.60%。微卫星标记应用:依据这些微卫星重复序列的两侧翼序列,使用引物设计软件Primer3.0和Primer5.0设计引物120对,合成40对,以镜泊湖江鳕DNA为模板,进行PCR扩增、筛选,结果有22对引物能较好的扩增出特异条带,进而应用于镜泊湖,乌苏里江和黑龙江三个江鳕群体遗传学研究,发现其中15对引物可扩增出所需特异条带,可作为遗传标记。经POPGENE3.2,GENEPOP和PHYLIP3.63等软件分析得到镜泊湖,乌苏里江和黑龙江三个群体每个微卫星位点的平均等位基因数分别为3.00、3.87和3.13,平均有效等位基因数分别为2.103、2.779和2.583;三个群体位点平均观测杂合度分别为0.284、0.310和0.372,平均期望杂合度分别为0.347、0.378和0.427;15个微卫星标记在三个群体的平均多态性信息含量分别为0.310、0.340和0.370;三个群体间的遗传相似系数为0.895～0.932,群体间的遗传距离为0.071～0.111。