论文摘要
肿瘤是威胁人类健康的重大疾病之一,发病率居10种重大疾病的第二位。虽然肿瘤的诊治取得了很多进展,但对肿瘤患者的长期疗效仍然亟待提高。动物实验和对人体肿瘤的研究均表明生物节律参与肿瘤的发生、发展。本项目立足于研究近日节律核心基因mPeriod2（mPer2）和肿瘤的关系。探讨节律基因mPer2在肿瘤细胞内过表达或低表达对肿瘤细胞生长和凋亡的影响,并深入研究其机制,进而寻求治疗肿瘤的新方向。Per2作为近日节律钟控系统的一个必不可少的组成部分,不仅调节近日节律,同时还影响器官功能。我们首先研究了Per2在肿瘤细胞中高表达是否影响癌细胞生长或凋亡。本研究采用脂质体介导法,将mPer2真核表达质粒pcDNA3.1（+）-mPer2和空质粒pcDNA3.1（+）转染入小鼠Lewis肺癌细胞株（Lewis lung carcinoma cell, LLC）、小鼠乳腺癌细胞株（mouse mammary carcinoma cell,EMT6）和NIH 3T3细胞,采用MTT法、光镜下细胞计数绘制细胞生长曲线、细胞平板集落形成实验等方法研究mPer2过表达对小鼠肿瘤细胞LLC和EMT6细胞增殖的作用。利用流式细胞术、基因组DNA片断分析、Hoechst33342染色和电子显微镜观察细胞形态等方法研究mPer2过表达对小鼠肿瘤细胞LLC、EMT6细胞和NIH 3T3细胞凋亡的作用。本研究证实过表达mPer2能明显抑制小鼠Lewis肺癌细胞株和小鼠乳腺癌细胞株的生长增殖,并能明显诱导以上肿瘤细胞凋亡,但对正常细胞却无诱导凋亡作用。细胞周期检测发现mPer2过表达引起小鼠肿瘤细胞LLC、EMT6细胞G1期阻滞。mPer2过表达后,肿瘤细胞的细胞核DNA降解,呈现典型的DNA Ladder区带特征,Hoechst33342染色发现凋亡细胞明显增多。电子显微镜观察到mPer2过表达导致肿瘤细胞形态发生变化,细胞核染色质凝集,呈明显碎块状致密浓染。
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