腺苷2A受体、血管活性肠肽在偏头痛模型大鼠脑干及三叉神经节的表达变化

论文摘要

偏头痛是一种常见的发作性神经血管功能紊乱性疾病,已成为严重影响患者工作和生活的慢性病之一。其病因及发病机制目前尚无定论,致使药物治疗靶点各异。腺苷2A受体（adenosine 2A receptor,A2AR）属G蛋白偶联受体家族,可以与不同的G蛋白和蛋白激酶偶联,产生生物学效应。在中枢神经系统中,腺苷在其受体介导下调节着运动、神经元保护、睡眠、觉醒、疼痛、药物成瘾、脑卒中、神经退行性疾病等及其他重要的病理生理过程。血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）是一种脑肠肽,属于胰高血糖素/促胰液素族,广泛分布于中枢及外周神经系统中,具有调节平滑肌张力及神经内分泌功能、神经元保护等多种重要的生物学功能。Sebasti（?）o和Cunha等发现A2AR的激活可增强VIP对GABA释放的作用和降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP）在突触传递的作用。Hohoff等分析了265例MA/MO（migrainewith aura/migraine without aura）患者A2AR基因6个标记的单体型在MA病人的频率,证实A2AR基因变异与MA的发病机制有关。Ledent等发现A2AR基因敲除鼠出现痛觉减退。A2AR、VIP两者共同与偏头痛的关系目前仍不清楚,国内外未见报道。氟桂利嗪是长效非选择性的钙通道阻滞剂。国内外研究证实氟桂利嗪不但能有效地减少头痛的发作频率,减轻头痛的严重程度,且副作用较轻,是一种安全有效的偏头痛预防性治疗药物。本研究将建立硝酸甘油型实验性偏头痛大鼠模型,并利用氟桂利嗪进行干预,检测脑干及三叉神经节组织中A2AR mRNA及蛋白的表达和VIPmRNA及组织含量,比较上述各物质在发作期与间歇期的表达变化,以探讨A2AR、VIP与大鼠偏头痛的关系。方法1.动物分组及处理:以清洁级Sprague-Dawley（SD）大鼠为实验对象,模型组:依Tassorelli法皮下注射硝酸甘油注射剂10mg/kg,每周1次,共5周,制作实验性偏头痛模型,并于第2次造模后给予生理盐水10ml/kg/d灌胃,共4周;生理盐水对照组（简称对照组）:与模型组同步对照,以生理盐水注射代替硝酸甘油注射;药物干预组（简称干预组）:注射硝酸甘油制作实验性偏头痛模型,自第2次造模后给予氟桂利嗪5mg/kg/d灌胃,共4周。2.取材:发作期组和间歇期组分别于第5周造模后3h或4d,断头处死大鼠后取脑干及三叉神经节组织,液氮内保存。3.RT-PCR法半定量检测大鼠脑干及三叉神经节组织A2AR、VIPmRNA的表达量。4.Western-Blot法检测大鼠脑干及三叉神经节组织A2AR蛋白的表达量。5.放射免疫法测定大鼠脑干及三叉神经节组织VIP含量。结果1.模型组和干预组大鼠脑干及三叉神经节组织的A2AR mRNA和蛋白表达水平在偏头痛发作期均明显高于对照组（P＜0.05）,而在偏头痛间歇期,表达无明显变化（P＞0.05）。2.模型组及干预组大鼠脑干及三叉神经节组织的VIP含量在偏头痛发作期明显高于对照组（P＜0.05）,而在偏头痛间歇期,表达均无明显变化（P＞0.05）;VIPmRNA表达水平在偏头痛发作期和间歇期无明显变化（P＞0.05）。结论1.A2ARmRNA及蛋白和VIP组织含量表达上调可能与大鼠偏头痛发作有关。2.氟桂利嗪可以减轻偏头痛的发作,但与A2AR、VIP表达量的改变无关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 第一章 前言
• 第二章 实验材料
• 2.1 主要试剂
• 2.2 主要仪器与设备
• 第三章 实验方法
• 3.1 研究对象
• 3.2 实验动物分组
• 3.3 硝酸甘油实验性偏头痛大鼠模型制作、评估及取材
• 3.4 RT-PCR检测脑干及三叉神经节组织内A2AR和VIPmRNA的表达
• 3.5 Western-Blot检测组织A2AR蛋白的表达
• 3.6 放射免疫法测定组织VIP含量
• 3.7 统计学分析
• 第四章 结果
• 4.1 大鼠行为学变化及模型评价
• 4.2 总RNA样品质量检测
• 4.3 各组A2ARmRNA的表达及比较
• 4.4 各组A2AR蛋白表达及比较
• 4.5 各组VIPmRNA表达及比较
• 4.6 各组VIP组织含量及比较
• 第五章 讨论
• 5.1 A2AR与偏头痛
• 5.2 VIP与偏头痛
• 5.3 氟桂利嗪与偏头痛
• 结语
• 第六章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢