几种农药对鲫鱼肝脏微粒体P450酶系的影响

论文摘要

细胞色素P450酶又称为微粒体混合功能氧化酶(MFO),是催化药物代谢的主要酶系,不仅能够催化一些具有重要生理功能的内源性物质如激素、脂肪酸、萜类化合物等的生物合成代谢,而且参与许多外源性物质包括除草剂、杀虫剂、杀菌剂、药物、环境污染物及其它有毒物质的生物氧化。现今,对它的研究主要集中在大、小鼠及医药领域,有关环境指示生物的报道很少,目前还未见农药对鲫鱼P450酶系影响的研究报道。本文对鲫鱼肝脏微粒体P450进行了初步研究,以为在环境毒理学领域进一步研究应用提供理论基础。取健康鲫鱼30尾,分三组每组10尾,用差速离心法、钙沉淀法及聚乙二醇法分别提取各组鲫鱼肝脏微粒体,并测定微粒体蛋白活性及微粒体中P450活性,采用(日立7020)全自动生化分析仪测定微粒体蛋白活性,紫外分光光度法测定CYP450酶系活性.结果表明本实验所建立的三种提取鲫鱼肝微粒体的方法及各方法提取的微粒体中细胞色素P450活性的检测方法灵敏可靠,重复性好,可用于CYP450的系统研究。氟吗啉、氧乐果、阿特拉津及多虑联苯对鲫鱼腹腔注射进行急性毒性试验。结果表明各药对鲫鱼的半数致死量分别为:氟吗啉LD50为104.6mg/kg,氧乐果LD50为246.9mg/kg,阿特拉津LD50为217.9mg/kg,多氯联苯LD50为247.2mg/kg。以多氯联苯为受试药物,采用腹腔注射法给鲫鱼连续染毒五天,分别以差速离心法、钙沉淀法和聚乙二醇法提取鲫鱼肝脏微粒体,测定并比较三种方法提取微粒体的P450酶系活性,结果显示三种方法提取的微粒体测定的P450及NCCR酶活性有明显的差别,且差速离心法提取的微粒体测得的P450酶活性最好,存在明显的量效关系。因此,针对P450测定结果比较三种方法优劣顺序为:差速离心法>聚乙二醇法>钙沉淀法。在鲫鱼肝微粒体水平上研究了氟吗啉、氧乐果及阿特拉津等几种药物对鲫鱼肝脏微粒体P450酶系的影响,试验设六个剂量组。氟吗啉按10mg/kg体重、氧乐果、阿特拉津及多氯联苯都按20mg/kg体重剂量腹腔注射染毒,1次/d×5;各组末次染毒24小时后杀鱼取肝作进一步试验,结果表明,多氯联苯对P450酶及NCCR酶活性都有明显诱导作用,阿特拉津也对鲫鱼P450酶表现显著诱导作用,氟吗啉和氧乐果对P450酶系没有显著影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 引言
• 1.1 农药概述
• 1.1.1 农药的施用现状
• 1.1.2 农药的危害
• 1.2 细胞色素P450 的概述
• 1.2.1 CYP450 的命名
• 1.2.2 CYP450 的亚型
• 1.2.3 P450 的分布
• 1.2.4 P450 的生物学功能
• 1.2.5 P450 酶系各组成成分的作用及其循环催化机制
• 1.2.6 P450 研究常用的方法
• 1.2.7 影响CYP450 活性的因素
• 1.2.8 细胞色素P450 的多样性
• 1.2.9 细胞色素P450 与除草剂代谢
• 14DM'>1.2.10 杀菌剂作用靶标酶P450_14DM
• 1.2.11 P450 的诱导与抑制
• 1.3 国内外研究现状
• 1.3.1 CYP450 作为生物标志物在毒理学上的应用
• 1.3.2 CYP450 作为重要指标对药物进行安全性评价
• 1.3.3 CYP450 作为生物学指标评价毒物毒性
• 1.3.4 细胞色素P450 作为生物标志物评价毒物毒性及对环境进行监测的优缺点
• 1.4 本研究要解决的问题
• 第二章 正文
• 2.1 鲫鱼肝脏微粒体提取方法的研究及其P450 酶系测定方法的建立
• 2.1.1 材料与方法
• 2.1.2 方法
• 2.2 几种药物对的鲫鱼急性毒性研究
• 2.2.1 材料与方法
• 2.3 三种方法提取鲫鱼肝脏微粒体分别测定P450 酶系活性并进行比较
• 2.3.1 试验材料
• 2.3.2 试验方法
• 2.3.3 数据处理
• 2.4 三种药物对鲫鱼肝脏微粒体P450 酶系的影响
• 2.4.1 供试药物
• 2.4.2 材料
• 2.4.3 方法
• 2.4.4 数据处理
• 第三章 结果与分析
• 3.1 鲫鱼肝脏微粒体提取方法的研究及其P450 酶系测定方法的建立结果
• 3.1.1 甲醛标准曲线
• 3.1.2 4-氨基酚标准曲线
• 3.1.3 肝微粒体蛋白及细胞色素P450 酶系测定结果
• 3.2 几种药物急性毒性试验结果
• 3.2.1 中毒症状
• 3.2.2 4 种药物对鲫鱼急性毒性
• 3.3 三种方法提取鲫鱼肝脏微粒体比较P450 酶系测定结果
• 3.3.1 钙沉淀法提取微粒体及其P450 酶系的测定结果
• 3.3.2 聚乙二醇法提取微粒体及其P450 酶系测定结果
• 3.3.3 差速离心法提取微粒体及其P450 酶系测定结果
• 3.4 三种药物对鲫鱼肝脏微粒体P450 酶系的影响
• 第四章 结果讨论
• 4.1 鲫鱼肝脏微粒体提取方法的建立及其P450 酶系的测定
• 4.2 多氯联苯、氟吗啉、阿特拉津、乐果等药物对鲫鱼的急性毒性研究
• 4.3 三种提取鲫鱼肝脏微粒体的方法比较
• 4.4 三种药物对鲫鱼肝脏微粒体P450 酶系的影响
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介