青蒿提取物对K562细胞增殖及分化的影响

论文摘要

目的：白血病是严重威胁人类生命健康的造血系统恶性肿瘤。迄今白血病的治疗仍主要采用传统的大剂量联合化疗,但此疗法副作用大,复发率高,尤其对机体的免疫功能和骨髓造血功能有极大损伤。因而寻找特异性高,对机体毒副作用小的新型天然抗肿瘤药,是当今抗肿瘤药物研究的热门课题。青蒿属菊科植物,青蒿素是从青蒿叶中分离的抗疟疾有效成份。研究证实：青蒿素不仅具有良好的抗疟疾作用而且又有抗肿瘤等多方面的药理作用。文献报道青蒿素衍生物对多种恶性肿瘤包括血液恶性肿瘤有选择性抑制作用。K562细胞是一种分化很低的人类髓系白血病细胞,具有向红系、粒-单核或巨核系细胞分化的可能性,是研究白血病细胞增殖分化的理想模型。本研究以分离纯化的青蒿提取物为对象,采用现代生物学技术,探讨了其对K562细胞增殖、分化的影响,旨在阐述青蒿提取物具有抑制白血病的作用,为研究天然抗肿瘤药物提供理论与实验依据。方法：本实验采用水溶剂对青蒿素有机溶剂提取后残余母液进行有效成分提取,提取物纯化结晶。应用台盼兰拒染法、四甲基偶唑盐（MTT）法和流式细胞术（FCM）,研究青蒿提取物体外作用对K562细胞增殖的影响及其与细胞周期调控的关系；通过光镜、电镜观察与图像分析法,研究经青蒿提取物诱导后K562细胞形态学（包括胞核成熟情况、核浆比例、细胞直径、细胞体积、细胞器及特殊物质形成）的改变；细胞化学染色检测细胞内过氧化物酶（POX）及非特异性脂酶（a-NAE）表达的变化。采用造血祖细胞体外半固体培养技术,观察青蒿提取物对小鼠多向造血祖细胞（CFU-Mix）（?）曾殖分化的作用。结果：1提取青蒿提取物并进行鉴定。2青蒿提取物对K562细胞增殖及分化的影响。2.1青蒿提取物对正常小鼠CFU-Mix和K562细胞增殖有双向调节作用：青蒿提取物在一定浓度范围内（3.125-25.OOmg/L）对体外培养的正常小鼠CFU-Mix无明显影响；MTT法显示：青蒿提取物（3.125-25.OOmg/L）对K562细胞的增殖有抑制作用,并随着药物浓度增加和时间的延长,其抑制作用逐渐增强。2.2青蒿提取物可阻止K562细胞进入细胞增殖周期：流式细胞术检测显示,青蒿提取物（12.5-25.0mg/L）作用K562细胞2天可明显减少处于增殖活跃期的细胞数,提示青蒿提取物可阻止细胞进入增殖周期,从而抑制白血病细胞的增殖。2.3青蒿提取物可诱导K562细胞凋亡：流式细胞术检测显示青蒿提取物（12.5-25.0mg/L）作用K562细胞2天可出现10-20%的凋亡率。电镜下可见到凋亡小体。2.4青蒿提取物诱导K562细胞分化：①形态学观察表明：经青蒿提取物诱导后,K562细胞体积增大,细胞核固缩,胞浆中见大量空泡,胞浆量减少,核膜不完整。②细胞化学检测显示：经青蒿提取物诱导后,K562细胞的血红蛋白和过氧化物酶表达明显增加。结论：青蒿提取物能有效抑制K562细胞增殖。我们推测青蒿提取物对肿瘤细胞的杀伤具有较高的选择性,它是一种毒副作用低,有待深入研究和开发的天然抗肿瘤药物。

论文目录

• 英文缩写及中英文对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 青蒿水提物抗肿瘤活性成分的提取与鉴定
• 1 材料
• 2 提取方法
• 3 结果鉴定
• 第二部分 青蒿提取物对K562细胞增殖及分化影响的实验研究
• 1 材料
• 2 实验结果
• 3 讨论
• 结语
• 参考文献
• 图片
• 文献综述：青蒿素及其衍生物抗肿瘤研究进展
• 致谢
• 学习期间撰写发表的论文目录