论文摘要
因外伤、肿瘤或先天畸形引起的颅骨缺损临床上十分常见，大部分的颅骨缺损需要手术修补，骨组织工程的兴起和快速发展为治疗骨缺损提供了新的思路和手段。在种子细胞和细胞载体材料的研究取得了一定的成果的基础上，已经可以在体外成功的将种子细胞复合在载体材料上培养，构建出细胞型组织工程人工骨。并应用在体外构建出的细胞型组织工程人工骨进行修复骨缺损的实验研究。组织工程骨也面临迅速血管化的关键问题。充分的血液供应是保证组织工程化人工骨体内存活的决定性因素。血管再生成为骨组织工程从体外研究过度到体内研究，从基础研究向临床应用过渡的关键性问题。如何寻找有效，准确，灵敏的监测手段，正确评估组织工程骨的血管再生效率，也是目前探讨的热点问题。本实验采用兔颅骨骨膜提取、分离、培养扩增，并与新型的纳米级颅骨替代材料（碳纳米管复合磷酸三钙骨水泥生物复合材料）共同培养，观察其生长情况以及组织相容性，并进行动物实验来观察材料植入体内后的骨传导、骨诱导及骨生成情况，并采用放射学以及组织形态学的方法来观测其血管化问题。本文共分以下三部分内容： 一、骨膜源性成骨细胞的分离、鉴定与纳米级颅骨替代及诱导材料复合的体外联合培养实验研究 目的： 探讨颅骨骨膜源性成骨细胞体外培养的可能性，观察其生长特点及成骨能力；采用颅骨骨膜源性的成骨细胞与材料三维联合培养观察成骨细胞与碳纳米管复合α-磷酸三钙骨水泥联合培养情况，评估新型颅骨修复材料的生物相容性。 方法： 1、成骨细胞的提取及体外培养 2、成骨细胞的形态学及生长特性、成骨能力的观察 1)、倒置相差显微镜、扫描电镜、细胞染色方法观察原代培养、传代培养细胞生长情况及形态特征。 2)、细胞生长曲线的测定：应用MTT法测定细胞生长曲线。 3)、碱性磷酸酶染色：应用碱性磷酸酶试剂盒进行成骨细胞内碱性磷酸酶染