论文摘要
随着广谱抗菌药物的开发和广泛应用,细菌耐药问题日趋严重,其中最主要的耐药机制是细菌产生β-内酰胺酶,而AmpC β-内酰胺酶是其中的一个重要分支。AmpC酶属于分子生物学分类（Ambler分类）中的C类酶及功能分类（Bush分类）中的1类酶,能水解第三代头孢菌素,且不被β-内酰胺酶抑制剂所抑制。最初这些酶是一些自然发生的染色体介导的AmpC酶,主要见于肠杆菌属菌种、弗劳地枸橼酸杆菌、普鲁菲登菌属菌种等。自80年代末首次分离出质粒介导的AmpC酶以来,新的质粒介导的AmpC酶在世界各地被陆续报道,且以每年新发现1～2个的速度不断增长,迄今已有三十余种。大多数质粒介导的AmpC酶来源于染色体AmpC酶,其耐药基因可通过整合子、转座子和插入序列等多种形式在染色体与质粒之间转移,造成耐药性的广泛传播,危害较染色体编码的AmpC酶更大,已成为威胁公众健康的又一棘手问题。 本研究对我院2000年7月重症监护病房分离的一株携带AmpC酶耐药基因的肺炎克雷伯菌Kp6进行研究。采用接合试验确证耐药基因是否位于质粒。抽提接合菌质粒,用限制性内切酶HindⅢ消化,酶切粘末端用Taq酶补平并在末端加单个的脱氧腺苷（A）,与pGEM-T Easy载体进行T-A克隆。在含氨苄西林和头孢西丁的平板上筛选重组菌,抽提重组菌质粒,酶切分析,对插入片段用步移法测
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