论文摘要
黄瓜花叶病毒(Cucumber Mosaic Virus, CMV)是一种世界性病害,寄主范围广、能够被蚜虫传播、防治十分困难。尽管防治CMV的方法有多种,其中药剂防治会增加成本并带来环境污染;疫苗因环境变化而表现不稳定:自然抗病育种周期长且效率低;因而利用基因工程进行种质资源创新成为控制CMV的重要手段。特别是双链RNAs介导的基因沉默为改良作物对CMV的抗性发挥重要作用,但仅仅对供体CMV株系具有抗性,且低温时抗性容易突破,限制了生产应用。而miRNAs介导的基因沉默不仅诱导目标病毒的抗性,且保持低温时抗性稳定性,并将目标片段最小化和降低病毒异源重组风险。本研究利用miRNAs基因沉默技术,以抗性突破株系CMV-AN的2b基因高度保守区域为靶标,以植物起源的miRNA319前体为骨架,进行人工miRNA319的构建,以期望诱导CMV的广谱抗性。本研究结果如下:1.利用抗性突变株系CMV-AN 2b基因的30bp保守序列为靶标,以植物miR319前体为骨架,通过引物融合技术和OverlapPCR技术,用靶序列替换miR319前体miRNA:miRNA*区的突出部分,成功获得了amiR319。2.在限制性酶切位点BamHI和HindⅢ处将amiR319导入含双T7启动子的原核载体pLITMUS28i,获得重组载体pLITMUS28i-amiR319,以pLITMUS28i-miR319作对照,导入大肠杆菌HT115(RNaseⅢ缺失)菌株中供研究离体条件下amiR319介导CMV的抗性。3.利用限制性酶切位点BamHI和NcoⅠ将amiR319与中间载体替换获得2×35S:amiR319:poly(A)片段,并将其导入植物双元表达载体pCAMBIA1300,获得重组载体PCAMBIA1300-amiR319,以pCAMBIA1300-miR319作对照,分别导入农杆菌LB4404,通过酶切验证2x35S:amiR319:poly(A)片段及对照片段均为正向插入。4.利用农杆菌介导的叶盘转化法,将重组载体pCAMBIA1300-amiR319、pCAMBIA1300-miR319转入到三生烟中,转基因烟草对CMV的抗性有待于进一步研究。
论文目录
相关论文文献
- [1].巨细胞病毒(CMV)感染与溃疡性结肠炎患者临床特征、预后的关系[J]. 微量元素与健康研究 2020(03)
- [2].烟草品种(系)CMV抗性鉴定[J]. 安徽农业科学 2020(10)
- [3].儿童CMV感染致传染性单核细胞增多综合征的临床特征[J]. 中国热带医学 2015(10)
- [4].更昔洛韦在D+/R+肾移植术后预防CMV感染的疗效观察[J]. 现代生物医学进展 2016(05)
- [5].利用CMV评估堆石料压实质量的神经网络模型[J]. 水力发电学报 2020(04)
- [6].精神分裂症患者10例抗巨细胞病毒(CMV)治疗临床观察[J]. 中国民康医学 2008(11)
- [7].CMV相关性肺炎临床特点及更昔洛韦的疗效分析[J]. 华南国防医学杂志 2010(04)
- [8].1415例妊娠期妇女巨细胞病毒(CMV)的检测分析[J]. 大家健康(学术版) 2014(08)
- [9].异基因造血干细胞移植受者CMV检测方法的比较[J]. 河南医学研究 2012(01)
- [10].转基因猪细胞中CMV启动子区域甲基化的研究[J]. 中山大学学报(自然科学版) 2015(06)
- [11].CMV病毒对甜椒幼苗生理生化指标的影响[J]. 浙江农业学报 2015(09)
- [12].重庆南瓜病毒病病原ELISA检测及CMV变异分析[J]. 园艺学报 2010(03)
- [13].CMV启动子驱动报告基因EGFP在转基因猪和转基因小鼠不同组织中的表达效率比较[J]. 农业生物技术学报 2015(10)
- [14].CMV侵染胁迫下黄瓜重要功能基因表达及代谢响应的研究[J]. 中国农业科学 2008(11)
- [15].CMV血清学检测与孕期宫内感染的关系[J]. 中国优生与遗传杂志 2008(06)
- [16].单用更昔洛韦与联合阿昔洛韦对小儿CMV肺炎疗效的比较[J]. 吉林医学 2011(25)
- [17].新生儿期CMV病毒感染与婴儿肝炎综合征的相关性分析[J]. 临床合理用药杂志 2014(22)
- [18].荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)定量测定尿液CMV在孕妇普查中的应用及意义[J]. 中国优生与遗传杂志 2008(09)
- [19].侵染美人蕉的CMV基因组全序列及其致病性分析[J]. 植物病理学报 2011(02)
- [20].异基因造血干细胞移植患者CMV感染的早期检测[J]. 中国医疗前沿 2011(03)
- [21].EBV合并CMV感染的传染性单核细胞增多症患者T细胞免疫状态及炎症指标变化[J]. 中华医院感染学杂志 2020(19)
- [22].HFOV和CMV对新生儿胎粪吸入综合征血流动力学的效果对比[J]. 数理医药学杂志 2018(09)
- [23].利用CMV启动子构建PRRSV感染性克隆的研究[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版) 2016(07)
- [24].NCPAP和CMV早期治疗新生儿呼吸窘迫综合征的疗效比较[J]. 安徽医药 2013(12)
- [25].抗CMV和ToMV RNAi载体的构建及加工番茄遗传转化[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版) 2014(01)
- [26].贵州烟草蚜传病毒病(PVY、CMV)发生规律及其预测模型的初步研究[J]. 植物保护 2012(05)
- [27].活化T淋巴细胞亚群检测在肾移植术后急性排斥反应和CMV感染鉴别中的应用[J]. 国际检验医学杂志 2011(15)
- [28].加工番茄上CMV与BBWV的ELISA检测及相关性分析[J]. 安徽农业科学 2009(13)
- [29].加工番茄CMV与ToMV的ELISA检测及其相关性分析[J]. 石河子大学学报(自然科学版) 2009(02)
- [30].白菊花抗CMV诱导的HEL细胞凋亡作用及其机制研究[J]. 放射免疫学杂志 2010(01)