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PLGA-无机盐复合生物材料对牙胚细胞和牙髓干细胞增殖分化的影响

2020-12-03阅读(444)

PLGA-无机盐复合生物材料对牙胚细胞和牙髓干细胞增殖分化的影响

论文摘要

由牙周病、龋齿、外伤或是遗传引起的牙齿缺失给大多数人的生活带来很大的不便。能够取代缺失的牙齿的、具有生物活性的组织工程牙齿将给目前的临床治疗带来新的技术。为了使具有生物活性的组织工程牙齿成为可能,找出适合用于进行组织工程牙齿塑形的生物支架材料,本研究比较了四种生物支架材料即聚乳酸-聚乙醇酸（PLGA）、聚乳酸-聚乙醇酸-磷酸三钙（PLGA/TCP）、聚乳酸-聚乙醇酸-羟基磷灰石（PLGA/HA）、聚乳酸-聚乙醇酸-碳酸钙-羟基磷灰石（PLGA/CDHA）对小鼠磨牙牙胚细胞和人牙髓干细胞增殖分化的影响,主要内容及结论如下:1、利用细胞活性MTT检测方法,发现四种生物支架材料对Hela细胞的毒性为零级;对人牙髓干细胞（DPSCs）都有毒性,其中PLGA/CDHA的毒性最大;2、牙胚细胞-生物支架材料复合物在小鼠肾囊膜下生长6周,细胞在PLGA/HA中增殖最多,在PLGA中增殖最少;DPSCs-生物支架材料复合物在裸鼠肾囊膜下生长5周,200um孔径PLGA/HA、320um孔径PLGA/CDHA和320um孔径PLGA/TCP的增殖率相当,PLGA增殖率最低的;3、检测肾囊膜下生长不同时期的牙胚细胞-生物支架材料复合物和DPSCs-生物支架材料复合物的钙盐沉淀情况,发现PLGA/TCP和PLGA/CDHA的钙盐形成情况较好,PLGA/HA次之,PLGA最差;4、细胞吸附性检测发现PLGA/HA吸附性最好,而且6周后吸附了牙胚细胞的复合物PLGA/CDHA和纯PLGA的外部有形成结构不完整的牙齿;5、牙胚组织-生物支架材料复合物在小鼠肾囊膜下6周后均能成牙。综合所有实验我们得出结论:PLGA/HA和PLGA/TCP有利于细胞增殖,PLGA/TCP和PLGA/CDHA有利于细胞分化,PLGA既不利于细胞增殖也不利于细胞分化。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 中文文摘
  • 第1章 绪论
  • 1.1 组织工程学的基本范畴
  • 1.1.1 组织工程学的定义及基本原理
  • 1.1.2 组织工程学的发展
  • 1.2 组织工程的研究内容
  • 1.2.1 种子细胞
  • 1.2.2 细胞生长调节因子
  • 1.2.3 细胞外基质（ECMs）
  • 1.3 组织工程与牙齿再生
  • 1.4 研究目的及意义
  • 第2章 实验材料与实验方法
  • 2.1 实验材料
  • 2.2 实验仪器与设备
  • 2.3 实验主要药品与耗材
  • 2.4 实验试剂及其配方
  • 2.4.1 生物支架材料
  • 2.4.2 主要试剂及配制
  • 2.5 实验方法
  • 2.5.1 牙髓干细胞的分离与培养
  • 2.5.2 细胞冻存与复苏
  • 2.5.3 DPSCs单细胞悬液的制备
  • 2.5.4 MTT细胞增殖及细胞毒性检测实验
  • 2.5.5 DPSCs-生物支架复合物的构建及培养
  • 2.5.6 小鼠牙胚细胞—生物支架复合物的体外构建及培养
  • 2.5.7 小鼠牙胚组织—生物支架复合物的体外构建及培养
  • 2.5.8 组织切片及形态分析
  • 第3章 实验结果
  • 3.1 四种生物支架材料的细胞毒性
  • 3.1.1 生物支架材料浸提液对人子宫颈癌细胞（Hela细胞）的影响
  • 3.1.2 生物支架材料浸提液对人牙髓干细胞（DPSCs）的影响
  • 3.2 生物支架材料对小鼠磨牙牙胚细胞及牙髓干细胞增殖的影响
  • 3.2.1 牙胚细胞在不同生物支架材料中的存活增殖情况
  • 3.2.2 牙髓干细胞在不同生物支架材料中的存活增殖情况
  • 3.3 von Kossa染色法检测细胞-生物支架材料体内移植后的钙盐沉淀情况
  • 3.4 牙胚细胞在不同生物支架材料外成牙情况
  • 3.5 牙胚组织在不同生物支架材料外成牙情况
  • 第4章 分析与讨论
  • 4.1 E13.5小鼠磨牙牙胚细胞的成牙潜能
  • 4.2 生物支架材料影响牙髓干细胞的增殖
  • 4.2.1 生物支架材料浸提液影响牙髓干细胞体外培养的增殖
  • 4.2.2 体内培养时PLGA不利于牙髓干细胞增殖
  • 4.3 PLGA/CDHA、PLGA/TCP有利于牙胚细胞、牙髓干细胞分化
  • 4.4 不同生物支架材料的成牙情况及其应用设想
  • 结论
  • 一、PLGA/CDHA浸提液不利于DPSCs的增殖
  • 二、在体内PLGA不利于细胞增殖
  • 三、PLGA/TCP和PLGA/CDHA有利于细胞分化
  • 四、牙胚组织在生物支架外再生出类似天然牙齿结构的牙冠
  • 下一步研究计划
  • 研究展望
  • 附录1 英文缩略语表
  • 附录2 出生后1-4天小鼠下颌第一磨牙钙盐沉淀情况
  • 参考文献
  • 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果
  • 致谢
  • 个人简历

    • 相关论文文献

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