秋葵素对糖尿病肾病早期大鼠蛋白尿以及足细胞裂孔膜蛋白nephrin表达的影响

论文摘要

目的：本文以传统中医学理论为指导,通过动物实验研究,观察秋葵素（黄蜀葵花总黄酮）对糖尿病肾病早期大鼠蛋白尿的影响,并探讨其可能作用的分子机理。材料和方法：雄性SD大鼠40只,随机分成4组：正常对照组（NS）、模型组（DN）、秋葵素低剂量组（LTFA）、秋葵素高剂量组（HTFA）,采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）造模,大鼠造模成功后即开始灌服低和高剂量（50和200mg/kg/d）秋葵素的羧甲基纤维素（CMC,30mg/ml）溶液,正常对照组灌服等量CMC溶液。连续给药24周,于末次给药24h后留取各组大鼠24小时尿液,全自动生化分析仪测定各组大鼠24小时尿蛋白定量及尿微量白蛋白,酶联免疫吸附法测定各组大鼠尿肌酐值。肾脏组织切片后通过电子显微镜、HE染色及PAS染色观察各组大鼠肾脏组织病理改变。蛋白免疫印迹及实时定量PCR法检测各组大鼠肾脏组织nephrin蛋白水平和mRNA的表达。结果：实验结果显示DN组大鼠和NS组相比其24h-UTP显著增加,且差异具有统计学意义,P<0.05。低剂量与高剂量的秋葵素干预糖尿病肾病早期模型大鼠后24h-UTP、Urinary mAlb/Cr与DN组比较均降低,但仅HTFA组与DN组比较差异具有统计学意义（P<0.05）；肾脏组织切片后电镜及HE染色结果显示：DN组肾小球基底膜增厚,足细胞排列紊乱,数目减少,足突增宽、融合。低剂量与高剂量的秋葵素干预后肾小球基底膜病变减轻,细胞外基质减少,足细胞数目增多,足突融合减轻；运用图像分析软件计算PAS染色阳性面积与每个肾小球正切面积的比值,结果发现DN组大鼠肾脏组织PAS染色阳性面积与每个肾小球正切面积的比值显著增加（P<0.05）,低剂量与高剂量的秋葵素干预均能降低DN大鼠肾脏组织PAS染色阳性面积与每个肾小球正切面积的比值,但前者与DN组比较差异无统计学意义（P>0.05）,而后者与DN组比较具有显著性差异（P<0.05）；肾脏组织蛋白免疫印迹及实时定量PCR结果表明：低剂量与高剂量的秋葵素干预糖尿病肾病早期模型大鼠后肾脏组织nephrin蛋白的表达和mRNA水平的下降均较DN组明显减轻,但仅HTFA组与DN组比较具有显著性差异（P<0.05）。结论：TFA可显著降低DN早期大鼠24h-UTP和Urinary mAlb/Cr,减轻DN早期大鼠肾脏病理损伤,并且这一作用的发挥可能是通过增加肾脏组织足细胞nephrin mRNA和蛋白的表达实现的。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 理论研究
• 1. 现代医学对糖尿病肾病的认识
• 1.1 DN的临床分期
• 1.2 足细胞的基本结构和功能
• 1.3 DN时足细胞损伤的表现
• 1.4 足细胞损伤的机制（DN与足细胞损伤）
• 1.5 现代医学对足细胞损伤的治疗
• 2. 中医对糖尿病肾病的认识
• 2.1 病因病机的研究
• 2.2 黄蜀葵花降蛋白尿的研究
• 第二部分 实验研究
• 1 材料、仪器与方法
• 1.1 材料
• 1.2 仪器与设备
• 1.3 方法
• 2 结果
• 3. 实验结论和讨论
• 参考文献
• 附录
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果
• 致谢