空心莲子草抗HBV活性成分研究

论文摘要

乙型肝炎病毒CHBV)感染对人类的生命和健康具有严重的危害，现在国际公认的治疗乙型肝炎的抗病毒药物主要有干扰素和核若类似物两大类，然}fu由十这两类药物尚不能有效清除乙肝病毒的共价闭合环DNA （ cccDNA）等，因}fU不能彻底清除HBV感染，需要长期用药，但是会出现停药易反弹、长期用药出现耐药性等问题。因此，从资源丰富的中草药中寻找开发结构新颖的具有抗HBV活性的天然药物具有重要的意义。空心莲子草Alteraaathera philoxeroides （Mart.）Griseb为兑科（Amaranthaceae）莲子草属（Alternanthera）多年生宿根草本植物，又名空心兑、螃蛆菊、水花生等。曾收载十《中华人民共和国药典》（1977年工部），具有清热解毒、凉血利尿的功效。在我国各地均有分布。其化学成分主要包括二菇、黄酮、植物幽醇、葱醒及有机酸等;其药理活性主要为抗菌抗病毒作用，包括抗单纯疤疹病毒、乙肝病毒、流行性出血热病毒、流感病毒、汉主刚丙毒及登革热病毒等。经过课题组前期对空心莲子草氯仿和乙酸乙酷部位的研究，发现从中分得的部分二菇皂若和黄酮类化合物具有良好的抗HBV的活性，并b.经预实验发现这两类成分在正丁醇部位分布也非常广泛;经对前期分得的黄酮若类成分结构进行研究，发现黄酮若所连接的糖基为自然界非常少见的波依文糖，因此对十开发结构新颖的活性天然化合物具有重要的意义。另外，空心莲子草的超强繁殖能力，为其药效学研究提供了非常丰富的资源。为继续深入研究，本课题围绕空心莲子草的化学成分和抗HBV活性的物质基础展开研究。本实验将空心莲子草的正丁醇提取部位综合运用AB-8大孔吸附树脂、Sephadex LH-20,聚酞胺和硅胶柱层析等技术，共分离得到17个单体化合物。结合MS, 1H-NMR, 13C-NMR, HMBC, HSQC III IR等波谱技术鉴定出了12个化合物的结构，包括:1、黄酮类化合物4个:木犀草素一6-C渭-D一波依文糖-3‘一。渭-D-葡萄糖若Ckxx1}、木犀草素一6-C渭-D一波依文糖-4‘一。渭-D-葡萄糖若Ckxx2}、空心莲子草素一4‘一。渭-D-葡萄糖若Ckxx3)、空心莲子草素（kxx5）;2、二菇皂若类化合物5个:3-O渭-D-毗喃葡萄糖（1}3）-O-阱-D-毗喃葡萄糖〕-齐墩果酸-28-0渭-D-毗喃葡萄糖醛酸若Ckxx4)、齐墩果酸-3-0-/}-D-毗喃葡萄糖醛酸若Ckxx7)、竹节参若IV a C kxx8、3-O渭-D-毗喃葡萄糖醛酸丁酷一齐墩果酸-28-0岁-D-毗It南葡萄糖若Cl}x9}、常春藤皂若K Ckxx10};3,葱醒类化合物1个:2一甲基一1,3,6一二轻基一9,10-葱醒-3-O-a-L一鼠李糖(1}2-/}-D一葡萄糖若（kxx6）;4,幽醇类化合物两个:胡萝卜若Ckxx11}和声谷幽醇Ckxx12} o其中化合物kxxl, kxx2, kxx3和kxx4为新化合物，并b. kxx 1和kxx2互为同分异构体;kxx6, kxx9和kxx10为首次从该植物中分离得到。采用HBV-DNA转染人肝癌细胞所得的HepG2.2.15细胞为模型，对分离得到的单体化合物进行了初步的抗HBV活性筛选评价，首次发现两个新化合物kxx2和kxx3具有良好的抗HBV活性。kxx2和kxx3均对HBsAg的分泌均具有良好的剂量依赖性的抑制作用，其工Cs。分别为31.54和22.20 }M几;二者对HBeAg也表现出了一定的抑制作用，最高抑制率分别达到47.8%和50.1%0单体化合物kxx5, kxx7和kxx9的体外细胞毒性较大，表现为CCso<9.38g/ml，但在无毒浓度下，均未显示出抗HBV活性。化合物kxx4, kxx8和I kxx 10的体外细胞毒性较小，但几乎无抗HBV活性。结合本课题组分离得到的含有波依文糖的黄酮类化合物的结构特点及体外抗HBV活性，初步的构效关系评价表明:化合物发生糖若化的位置及游离一OH的位点会影响药物与病毒的相互作用;黄酮的二糖若体外抗HBV活性弱十单糖若，但是如果要降低黄酮单糖若的细胞毒性，可以采用对其结构进行糖若化;药物的溶解性与细胞毒性无关，但会直接影响到药效的发挥;黄酮母核中3’-OH的存在能够明显影响化合物的抗HBV活性，而3’-OH的甲基化对其抗HBV作用的发挥影响较小。活性单体化合物均为新化合物，可通过进一步的体内药效学实验研究，有望成为抗HBV作用特点显著的结构新颖的候选化合物;同时，可开展多种抗病毒活性的筛选评价，有可能发现其它抗病毒活性。另外，考虑到该类化合物的共同特点均是与波依文糖成碳若，其活性是否与波依文糖有关，还待深入探讨;并目‘由十碳若的低溶解性和难水解等特点，可能会影响其体内的代谢，因此应加强此类化合物的结构衍生化研究。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 HBV概况
• 1.2 抗HBV药物研究进展
• 1.2.1 核若类似物
• 1.2.2 免疫调节药物
• 1.2.3 抗乙肝病毒的天然产物及中草药
• 1.3 立题依据及意义
• 1.4 本论文的研究内容
• 第二章 空心莲子草正丁醇部位化学成分的研究
• 2.1 空心莲子草正丁醇部位分离鉴定的化合物（结构式、编号及中英文名称）
• 2.2 化学成分的结构鉴定
• 2.2.1 新化合物的结构鉴定
• 2.2.2 已知化合物的结构鉴定
• 2.3 实验部分
• 2.3.1 实验仪器与材料
• 2.3.2 空心莲子草药材
• 2.3.3 空心莲子草正丁醇部位的提取与分离
• 2.3.4 单体化合物的理化常数及波谱数据
• 2.4 讨论与小结
• 2.4.1 黄酮类化合物的结构与波谱学特征
• 2.4.2 二菇皂若类化合物的结构和波谱学特征
• 第三章 空心莲子草单体化合物抗HBV活性成分研究
• 3.1 实验仪器与材料
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 抗HBV活性筛选模型
• 3.2.2 待筛选单体化合物的准备
• 3.2.3 细胞存活实验
• 3.2.4 药物对HBsAg和HBeAg的分泌与合成的抑制实验
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 活性单体化合物
• 3.3.2 未检测到活性的单体化合物
• 3.4 讨论与小结
• 3.4.1 HepG2.2.15细胞模型
• 3.4.2 黄酮的波依文糖碳若体外抗HBV活性比较
• 3.4.3 活性单体化合物的研究前景展望
• 第四章 全文总结
• 4.1 研究结果
• 4.2 创造性成果
• 4.3 课题展望
• 参考文献
• 附录: 化合物的波谱图
• 附录: 综述
• 参考文献
• 附录: 论文
• 个人简历
• 致谢