miR-145促进天然免疫应答中巨噬细胞产生白细胞介素10及其表观遗传机制研究

论文摘要

抑炎性细胞因子白血病介素10（IL-10）的表达在免疫调节中发挥重要作用,其表达调控方式和相关机制目前受广泛关注。尽管在信号转导、转录调控和表观修饰等调控IL-10表达方面已有较多报道,但目前有关microRNA调控IL-10表达的研究报道却知之甚少。microRNA为近年来发现的一类小分子非编码RNA,它在包括免疫应答在内的许多生物学过程中均发挥重要的调控功能。本研究中,我们通过VSV病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞前后的高通量miRNA芯片筛选,发现VSV感染后胞内miR。145/miR-143的表达水平发生显著下调。进一步研究揭示TLRs及RIG-I信号活化所诱导的miR-145/miR-143表达下调依赖于天然免疫细胞I型干扰素的表达及其下游信号途径的活化。miR-145的功能研究提示其可以增强LPS诱导的巨噬细胞Il10转录活化,上调IL-10的表达,进而间接抑制IL-12 p70的产生。由于miRNA主要通过调控其靶基因的表达进而发挥生物学功能,进一步的机制研究阐明miR-145可以靶向抑制HDAC11的表达,而HDAC11为可促Il10基因沉默的表观调控蛋白。因此,本研究结果显示, miR-145可通过在转录后水平抑制表观调控蛋白HDAC11,从而上调天然免疫细胞活化后IL-10的表达,进而调控免疫应答处于适度状态。该结果对于天然免疫应答中抑炎因子IL-10表达的调控提出了新的机制。

论文目录

• 致谢
• 序言
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 第一部分 TLR及RIG-Ⅰ触发巨噬细胞MIR-145/MIR-143的表达下调依赖于Ⅰ型干扰素的产生及其下游信号
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 3 实验结果
• 3.1 TLR和RIG-Ⅰ活化信号可诱导巨噬细胞MIR-143/MIR-145表达下调
• 3.2 LPS诱导的巨噬细胞MIR-145表达下调不依赖于NF-κB和MAPK途径
• 3.3 LPS诱导的巨噬细胞MIR-145表达下调不依赖于PI 3K-AKT途径
• 3.4 LPS诱导的巨噬细胞MIR-145下调依赖于Ⅰ型干扰素的产生及其下游信号
• 4 讨论
• 5 结论
• 第二部分 MIR-145对LPS活化的巨噬细胞产生IL-10和IL-12的调控作用
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 3 实验结果
• 3.1 MIR MIMICS AND MIR INHIBITOR转染效率的检测
• 3.2 MIR-145对LPS活化的巨噬细胞IL-10和IL-12P70产生的影响
• 3.3 MIR-145高表达或受抑制状态下对LPS活化的巨噬细胞IL10和IL12B MRNA水平的影响
• 3.4 过表达MIR-145可上调LPS诱导的IL10启动子区的转录活化
• 4. 讨论
• 5. 结论
• 第三部分 MIR-145通过靶向作用于组蛋白去乙酰化酶HDAC11进而促进天然免疫应答中IL-10表达的表观调控机制研究
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 3 实验结果
• 3.1 MIR-145对LPS诱导的MAPK以及PI3K-AKT信号通路活化没有影响
• 3.2 MIR-145对小鼠HDAC11的靶向作用
• 3.3 干扰MHDAC11表达对LPS活化的巨噬细胞IL-10和IL-12P70产生的影响
• 4. 讨论
• 5. 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 作者简历及在学期间参加的科研工作