兔血浆SSAO的分离纯化及其酶动力学研究

论文摘要

背景与目的:血浆中含有氨基脲敏感型胺氧化酶（semicarbazide-sensitive amine oxidase,SSAO）。本研究的目的是纯化兔血浆中的SSAO蛋白,并以甲胺为底物研究兔血浆中具有SSAO酶活性的蛋白组分的酶动力学参数。材料与方法:利用DEAE-琼脂糖FF凝胶柱层析分离兔血浆蛋白,测定各收集组分的SSAO酶活性;以甲胺为底物测定SSAO酶动力学参数。结果:从兔血浆蛋白中分离得到两个具有SSAO酶活性的蛋白组分A和B。以甲胺为底物,未处理的血浆SSAO的酶动力学参数Km=1.83±0.13 mmol/L,Vmax=0.12±0.003 nmol/min/mg。蛋白组分B的酶动力学参数Km值（2.05±0.43 mmol/L）小于蛋白组分A的Km值（3.14±0.63 mmol/L）。组分B的酶动力学参数Vmax值（1.46±0.10 nmol/min/mg）小于组分A的Vmax值（2.85±0.20 nmol/min/mg）。结论:兔血浆含有两种SSAO酶组分,均可以催化甲胺氧化脱氨生成甲醛;组分A、B动力学特征有所不同。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语（符号表）
• 第一部分 兔血浆SSAO的分离纯化及其酶动力学研究
• 绪论
• 1 材料
• 1.1 主要试剂
• 1.2 仪器设备
• 2 方法
• 2.1 实验动物
• 2.2 颈动脉取血
• 2.3 盐析兔血浆SSAO酶蛋白
• 2.3.1 硫酸铵盐析
• 2.3.2 硫酸铵的浓度--饱和度
• 2.3.3 硫酸铵盐析过程
• 2.4 透析袋透析兔血浆SSAO酶蛋白
• 2.4.1 透析袋使用前处理
• 2.4.2 透析过程
• 2.5 柱层析纯化目的蛋白
• 2.5.1 阴离子交换层析
• 2.5.2 洗泵、去气泡
• 2.5.3 测定介质的动态载量（Dynamic Capacity）
• 2.5.4 超容量杯上样
• 2.5.5 阴离子交换柱层析
• 2.5.6 交替酸碱清洗层析填料
• 2.6 SSAO活性测定方法
• 2.7 蛋白浓度测定
• 2.7.1 制作BSA标准曲线
• 2.7.2 检测
• 2.7.3 确定样品蛋白含量
• 2.8 甲醛测定方法
• 2.9 血浆SSAO酶动力学研究
• 2.9.1 筛选孵育时间
• 2.9.2 筛选血浆用量
• 2.9.3 计算血浆SSAO的酶动力学参数
• 2.10 组分A、B的酶动力学研究
• 2.11 统计学分析
• 3 结果
• 3.1 分离纯化兔血浆SSAO酶蛋白
• 3.2 酶动力学特性研究
• 3.2.1 血浆SSAO反应时间
• 3.2.2 血浆用量
• M和V_MAX'>3.3 血浆SSAO的动力学参数 K_M和V_MAX
• M和V_MAX'>3.4 组分A和B的酶动力学参数 K_M和V_MAX
• 4 讨论
• 总结
• 参考文献
• 综述 SSAO与细胞生长和成熟
• 附录1 试剂配置
• 附录2 硫酸铵饱和度常用表
• 附录3 25℃下 0.1 mol/L 磷酸钾缓冲液的配制表
• 附录4 25℃下 0.1mol/L 磷酸钠缓冲液的配
• 致谢