论文题目: 工程化心肌组织培养的实验研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 军事预防医学
作者: 赵云山
导师: 张西正
关键词: 工程化心肌组织,胚胎干细胞,旋转生物反应器,不连续梯度离心,抗坏血酸
文献来源: 中国人民解放军军事医学科学院
发表年度: 2005
论文摘要: 目的:采用液态胶原为支架、分别以新生大鼠心室肌心肌细胞和胚胎干细胞来源的心肌细胞为种子细胞构建工程化的心肌组织。 内容:考察以液态胶原为支架构建工程化心肌组织细胞的接种密度和胶原用量对工程化心肌组织形成的影响,在此基础上建立从胚胎干细胞来源的心肌细胞构建工程化心肌组织的方法。 方法:采用胰酶消化法分离新生大鼠心室肌心肌细胞,建立起批量获得胚胎干细胞来源的心肌细胞的方法:采用旋转生物反应器批量扩增拟胚体、抗坏血酸诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化并采用Percoll不连续密度梯度离心富集心肌细胞。在此这些实验的基础上,以液态胶原为支架、分别以新生大鼠心室肌心肌细胞和胚胎干细胞来源的心肌细胞为种子细胞构建工程化的心肌组织。 结果:建立起新生大鼠心室肌心肌细胞分离、培养和鉴定方法以及批量获得胚胎干细胞来源的心肌细胞的方法。在此基础上,分别采用新生大鼠心肌细胞和胚胎干细胞来源的心肌细胞为种子细胞构建了类天然的工程化心肌组织。 结论:采用新生大鼠心室肌心肌细胞和胚胎干细胞来源的心肌细胞可以构建出类天然的工程化心肌组织。
论文目录:
摘要
英文摘要
第一章 绪论
1.1 研究的目的、意义
1.2 心肌组织工程基本原理及方法
1.3 心肌组织工程研究进展及存在问题
1.3.1 种子细胞
1.3.2 支架材料
1.3.3 工程化心肌组织构建
1.3.4 工程化心肌组织的培养
1.4 课题的提出
1.5 研究内容与研究方法
1.6 基本思路与逻辑结构
第二章 新生大鼠心室肌心肌细胞的分离、培养及鉴定
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 实验动物
2.2.2 实验仪器、器材
2.2.3 主要试剂及配制方法
2.3 实验方法
2.3.1 心肌细胞的分离
2.3.2 心肌细胞的培养
2.3.3 激光共聚焦观察
2.3.4 免疫组化染色
2.4 结果
2.4.1 心肌细胞的分离
2.4.2 心肌细胞的培养
2.4.3 激光共聚焦观察
2.4.4 免疫组化染色
2.5 讨论
2.6 结论
第三章 胚胎干细胞来源的心肌细胞的诱导和富集
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 细胞来源
3.2..2 实验仪器、器材
3.2..3 主要试剂及配制方法
3.3 实验方法
3.3.1 胚胎干细胞的扩增
3.3..2 胚胎干细胞的向心肌细胞诱导分化
3.3.3 胚胎干细胞来源的心肌细胞检测
3.3.4 胚胎干细胞来源的心肌细胞的药物反应
3.3.5 胚胎干细胞来源的心肌细胞的富集
3.4 实验结果
3.4.1 胚胎干细胞来源的心肌细胞分化
3.4.2 胚胎干细胞来源的心肌细胞的特征
3.4.3 胚胎干细胞来源的心肌细胞对药物的反应
3.4.4 心肌细胞的Percoll不连续密度梯度离心的富集
3.5 讨论
3.6 结论
第四章 以新生大鼠心室肌心肌细胞为种子细胞构建工程化心肌组织的实验研究
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 动物来源
4.2.2 实验仪器、器材
4.2.3 主要试剂及配制方法
4.3 实验方法
4.3.1 鸡胚抽提物的制备
4.3.2 Ⅰ型胶原的制备
4.3.3 新生大鼠心室肌心肌细胞的分离
4.3.4 工程化心肌组织的构建
4.3.5 工程化心肌的培养
4.3.6 H.E.染色
4.3.7 激光共聚焦观察
4.3.8 透射电镜观察
4.4 实验结果
4.4.1 细胞接种密度和胶原量对心肌细胞／胶原复合物构建的影响
4.4.2 环状工程化心肌组织的铸模和培养
4.4.3 组织学及免疫组织化学观察
4.4.4 激光共聚焦观察
4.4.5 透射电镜观察
4.5 讨论
4.6 结论
第五章 以ES源的心肌细胞为种子细胞构建工程化心肌组织的实验研究
5.1 引言
5.2 实验材料
5.2.1 动物来源
5.2.2 实验仪器、器材
5.2.3 主要试剂及配制方法
5.3 实验方法
5.3.1 EBs在旋转生物反应器中的扩增
5.3.2 胚胎干细胞来源的心肌细胞的诱导分化和富集
5.3.3 工程化心肌组织的构建和培养
5.3.4 H.E.染色
5.3.5 丫啶橙／溴化乙啶染色
5.3.6 激光共聚焦观察
5.3.7 免疫组化染色
5.3.8 透射电镜观察
5.4 实验结果
5.4.1 批量获得ES源心肌细胞
5.4.2 工程化心肌组织的构建
5.4.3 组织学观察
5.4.4 工程化心肌组织激光共聚焦观察
5.4.5 工程化心肌组织超微结构特征
5.5 讨论
5.6 结论
第六章 全文总结
6.1 全文主要结论
6.2 本研究的特色和创新点
参考文献
致谢
附录
文献综述
发布时间: 2005-09-05
参考文献
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