论文摘要
流行性感冒（简称流感）是由流感病毒感染引起的一种急性病毒性呼吸道传染病。目前流感仍是威胁人类健康的重大疾病之一,具有病情重和病死率高的特点,而且尚缺乏有效的治疗手段。流感相当于中医“时行感冒”,总属外感热病范畴。中医药在防治流感方面具有明显的优势,成为目前防治流感的重要研究方向。但是随着人类体质和疾病谱的改变,中医中药仍面临提高疗效与机制不明确的问题。在此背景下,本研究综合伤寒论六经辨证理论及温病学卫气营血、三焦辨证理论,进行了寒温并用法中药复方治疗流感的理论及实验研究。1理论研究首先,研究了中医外感热病学发展历程中相关的医学古籍及医家临床经验的有关内容,对其学术渊源及发展脉络进行梳理,并划分为五个历史时期。《内经》提出“热病”概念,奠定了理论基础;《难经》提出“伤寒有五”的学术观点;《伤寒论》创立了外感热病的六经辨证论治体系;温病学创立了卫气营血及三焦辨证理论体系,进一步发展丰富了中外感热病学。温病学理论体系的确立同时引发了寒温争鸣与融合。其次,对流感的病原学、流行病学、治疗现状、发病机理研究进展等现代医学研究概况进行文献学习,认为中医药应用于流感的防治有着广阔的前景第三,通过前面文献概述,认为《伤寒论》为代表的伤寒学说蕴含着丰富的温病理论,而温病学乃伤寒学的继承与发展,两者具有相关性,是中医外感热病辨证论治体系中不可分隔的两部分。因此,在此前提下推进寒温统一具有必要性与可行性。在诸医家所进行的“寒温统一”论的研究基础上,提出以中医外感热病学统一寒温,建立完整的中医外感热病体系。结合自然、气候、自然环境差异与当今临床实际,对流感的病因病机进行分析,提出对流感的治疗,应该根据八纲辨证思路,综合六经辨证与卫气营血、三焦辨证的治疗方法,在辨证思维与用药方面均以寒温并用为原则。2实验研究将NIH小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、利巴韦林组、Ⅰ号方高、中、低剂量组及Ⅱ号方高、中、低剂量组。各组小鼠在乙醚轻度麻醉下,正常对照组用0.9%生理盐水,其余各组用甲型流感病毒FM1稀释液滴鼻以建立流感病毒感染模型。用药组分别以高、中、低剂量Ⅰ号方与Ⅱ号方、利巴韦林进行干预,然后根据各部分的具体实验安排进行相关指标检测。主要包括以下实验:2.1急性毒性实验目的与方法:采用改进寇氏法,研究寒温并用法复方Ⅰ号方及Ⅱ号方高、中、低剂量对小鼠的毒性。结果显示:各用药组小鼠无死亡,实验所取各剂量的Ⅰ号及Ⅱ号方药物,无明显致毒性,药物安全。2.2Ⅰ号方及Ⅱ号方药效学研究实验目的与方法:药效学研究包括肺指数及死亡保护作用研究,观察小鼠体重及肺重,或逐日观察小鼠死亡数,研究寒温并用法复方Ⅰ号方及Ⅱ号方治疗甲型流感病毒FM1感染小鼠的有效性。结果显示:Ⅰ号方及Ⅱ号方治疗组较病毒模型组死亡率均明显降低,平均生存时间明显延长,肺指数明显降低,且呈正的量效关系。结论:Ⅰ号方及Ⅱ号方均能有效抑制流感病毒感染引起的小鼠的肺部炎症病变,降低小鼠死亡率,延长其生存时间。2.3Ⅰ号方及Ⅱ号方对甲型流感病毒感染小鼠血清细胞因子含量的影响目的与方法:采用ELISA方法测定小鼠血清细胞因子的含量,研究Ⅰ号方及Ⅱ号方对甲型流感病毒FM1感染小鼠的免疫调节作用。结果显示:与正常对照组相比,病毒模型组外周血清干扰素γ（IFN-γ）、白介素-2（IL-2）含量升高,与病毒模型组相比,Ⅰ号方、Ⅱ号方用药组外周血清IFN-γ、IL-2含量显著升高,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）含量显著降低。结论:Ⅰ号方与Ⅱ号方能改善流感病毒感染小鼠的免疫功能,调节促炎因子与抗炎因子分泌的平衡,具有免疫调节作用。Ⅰ号方与Ⅱ号方治疗流感的作用可能与免疫调节有关,且Ⅱ号方的作用优于Ⅰ号方。2.4Ⅰ号方及Ⅱ号方对甲型流感病毒感染小鼠肺脏氧自由基损伤影响目的与方法:采用硫代巴比妥酸法及黄嘌呤氧化酶法分别测定小鼠肺匀浆中MDA含量及超氧化物歧化酶（SOD）活力,研究寒温并用法复方Ⅰ号方及Ⅱ号方对甲型流感病毒FM1感染小鼠肺脏氧自由基损伤及其抗脂质过氧化能力的影响。结果显示:病毒模型组各时相肺组织中脂质过氧化物MDA的含量均较正常对照组显著升高,而具有抗氧自由基损伤作用的SOD活力较正常对照组显著下降。Ⅰ号方及Ⅱ号方治疗组与病毒模型组相比,各时段MDA含量下降,SOD活力上升。Ⅰ号方与Ⅱ号方比较,Ⅱ号方抗氧化自由基损伤作用较Ⅰ号方强,有显著性差异。结论:Ⅰ号方与Ⅱ号方能减少流感病毒感染小鼠由于炎症反应所致的脂质过氧化物产生,增强其抗氧化自由基损伤能力,减轻肺损伤,且Ⅱ号方疗效优于Ⅰ号方。2.5Ⅰ号方及Ⅱ号方抑制甲型流感病毒复制作用研究目的与方法:采用实时荧光定量PCR方法测定甲型流感病毒FM1感染小鼠肺组织内流感病毒复制量,研究Ⅰ号方及Ⅱ号方抑制甲型流感病毒复制的作用。结果显示:与正常对照组相比,病毒模型组小鼠肺组织中甲型流感病毒复制量显著增加,具有显著性差异;与病毒模型组相比,Ⅰ号方及Ⅱ号方能明显抑制流感病毒在感染小鼠肺组织的复制,且有显著差异;Ⅰ号方小鼠肺组织内流感病毒复制量低于Ⅱ号方组小鼠肺组织内病毒复制量,具有显著性差异。结论:Ⅰ号及Ⅱ号方能抑制甲型流感病毒FM1在感染小鼠肺组织中的复制,且Ⅰ号方抑制病毒复制作用强于Ⅱ号方。