Ezrin/p-ezrin在皮肤肿瘤中的表达及BAI抑制A431细胞增殖和侵袭力的机制

论文摘要

目的（1）探讨Ezrin,phos-Ezrin在正常皮肤（normal skin,NS）、脂溢性角化（seborrheic keratosis,SK）、基底细胞癌（basal cell carcinoma,BCC）、皮肤鳞癌（squamous cell carcinoma,SCC）中的表达及其与临床病理参数、预后之间的相关性。（2）研究黄芩素（Baicalein,BAI）对上皮鳞状细胞癌A431细胞的增殖、伪足及集落形成的影响,探索BAI对A431细胞无细胞毒性的最适抑制浓度范围。（3）探讨BAI抑制A431细胞增殖,影响A431细胞爬行运动及伪足形成的分子机制,明确BAI是否通过抑制Ezrin,phos-ezrin蛋白的表达来实现抗肿瘤侵袭转移的目的。方法（1）采用免疫组化法检测36例SCC、27例BCC和20例SK、10例正常人皮肤（normal skin,NS）中Ezrin及phos-Ezrin蛋白表达水平,COX回归分析二者与SCC预后的相关性。（2）以体外培养的人表皮鳞癌A431细胞为研究对象,用MTT法观察BAI对A431细胞的生长抑制作用;用光镜观察细胞生长的形态变化;扫描电镜观察siRNA及BAI对A431细胞伪足形成的影响;集落形成实验观察BAI对A431细胞的成瘤性的影响;细胞划痕实验检测BAI对A431细胞爬行运动的抑制作用;Trans-well检测BAI对A431细胞运动侵袭力的影响等细胞生物学行为的形态表现;（3）用流式细胞仪检测BAI处理A431细胞后,各期细胞比例和细胞凋亡率:RT—PCR检测BAI对A431细胞Ezrin蛋白mRNA表达量的影响;Western Blotting及免疫荧光技术检测BAI及siRNA对A431细胞Ezrin、phos-ezrin蛋白表达量的影响。结果1).Ezrin,phos-Ezrin在NS、SK、BCC、SCC中的阳性表达率分别为20.0%,10.0%;25.0%,15.0%;66.7%,77.7%和91.3%,97.2%,各组之间比较差异有显著性（P<0.01）。2).Ezrin,phos-Ezrin蛋白表达水平与皮肤肿瘤的性质、恶性程度（SCC的病理分级）、淋巴结转移密切相关（R1,r1=0.87,0.89;R2,r2=0.80,0.86;R3,r3=0.89,0.91,P<0.01,R1,R2,R3分别表示Ezrin与肿瘤性质,SCC病理分级,淋巴结转移的相关性;r1,r2,r3分别表示phos-ezrin与肿瘤性质,SCC病理分级,淋巴结转移的相关性）。3)MTT检测显示随着BAI作用时间的延长及剂量的增加对A431细胞增殖抑制作用增强,有明显的时间和剂量依赖性,与对照组比较差异有显著性（P<0.01）;光镜观察显示随黄芩素浓度的增大细胞生长速度明显受到抑制,形态变圆;电镜观察显示A431细胞伪足明显缩短,数量减少;Transwell证实不同浓度BAI处理A431细胞48h后穿过人工基底膜的细胞数量明显减少,与对照组比较差异有显著性（P<0.01）;同时BAI呈浓度依赖性地抑制A431细胞爬行运动。4)流式细胞仪检测显示随BAI浓度及作用时间的延长,细胞周期明显受到抑制,凋亡率显著增高,与对照组比较差异有显著性（P<0.05）;BAI呈浓度依赖性地抑制A431细胞Ezrin,Phos-Ezrin及Ezrin-mRNA的表达,与对照组比较差异有显著性（P<0.01）。5)BAI呈浓度依赖地抑制A431细胞MMP2、MMP9蛋白的表达。各组两两比较差异有显著性（P<0.05）。结论1)Ezrin,phos-Ezrin表达水平在SK、BCC、SCC组织中与皮肤肿瘤的性质、恶性程度（病理分级）和淋巴结转移有关,两者呈平行表达关系,联合检测可能成为预测皮肤恶性肿瘤转移及预后的重要指标。2)BAI处理48h后,抑制A431细胞增殖而无细胞毒性的最适剂量范围为10μM-30μM。3)BAI通过直接或间接抑制Ezrin,phos-Ezrin表达而抑制A431细胞的增殖,侵袭运动,爬行运动,从而达到抗肿瘤增生及浸润转移的目的。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英汉缩略词对照表
• 前言
• 一、Ezrin与肿瘤的发生、发展及浸润转移
• 二、黄芩素抗癌机制
• 三、本研究的目的
• 四、本研究的技术路线
• 第一章 Ezrin蛋白及其磷酸化水平在皮肤鳞癌、基底细胞癌、脂溢性角化中的表达及其临床意义
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二章 黄芩素抑制皮肤鳞癌细胞株A431增殖的体外研究
• 前言
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第三章 黄芩素对皮肤鳞癌A431细胞株ezrin/phos-ezrin蛋白表达及侵袭力的影响
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 论文小结
• 结论
• 综述一
• 综述二
• 致谢
• 附录 博士在读期间发表的研究论文