论文摘要
HBV是环境中存在的一种对人致病性较强的病毒。HBV感染后常可引起急性和慢性肝炎,肝硬化甚至肝癌,是中国现阶段最为突出的公共卫生问题之一。慢性肝炎病毒（HBV）感染呈世界性流行。我国属HBV感染高流行区。HBV具有易变性及准种的特性。目前,根据HBV全基因组序列差异≥8%或S基因序列≥4%,将HBV分为A、B、C、D、E、F、G、H等8个基因型。HBV基因型有明确的地理和人种的分布特征。HBV在慢性感染过程中,变异可自发产生,也可在体内因宿主免疫压力或药物压力下而产生。如慢性乙型肝炎可因前C区变异和/或C区基因变异,不表达HBeAg而分为HBeAg阳性和HBeAg阴性两大类。HBV C基因基本核心基因启动子变异（BCP）和前C区变异（PC）,可能与肝病严重程度有关。也具有一定的地域分布差别。HBV聚合酶有四个功能区,其中RT区有7个催化功能的基序,依次称为G、F、A、B、C、D、E区,其中,B、C、D区是P基因耐药变异最常见的部位。不同的核苷类似物耐药株的变异位点不同。新疆是个多民族居聚区,HBV感染及疾病谱有其特殊性。研究表明,新疆维吾尔族HBV基因型以D基因型为多,与我国内地以B、C基因型为主的流行情况有所不同,为进一步证实新疆地区的不同民族HBV感染者的基因型分布特征,了解新疆不同民族的基因亚型的分布,前C区变异和C区变异,耐药变异等情况,为今后防治HBV奠定了理论的基础。目的:进一步证实新疆慢性HBV感染者的HBV基因型分布特征,了解新疆不同民族的基因亚型,PC、BCP变异及耐药变异的特征,为进一步研究防治HBV提供科学依据。尤其是研究新疆HBV感染者基因型、亚型分布有无特征。新疆HBV感染者的HBV PC变异和BCP变异与HBV感染病情严重性和HBeAg阴性有无关联性。了解P基因区变异与HBV不同基因型是否有联系以及抗病毒药物效果与P基因区变异之间的关系,旨在为今后防治HBV感染提供科学依据。方法:收集331例新疆慢性HBV感染者的血清,其中慢性乙型肝炎（CHB）240例,乙肝肝硬化（LC）64例,肝癌（HCC）27例。1)采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法,进行基因型、基因亚型、PC变异、BCP变异的检测,并对部分标本用直接测序法进行验证,所得的测序结果采用生物信息学技术进行分析比较。2)对随机选择的14例标本进行全基因测序,选择14例用核苷类似物治疗的CHB及4例未用核苷类似物的标本进行P基因区测序,然后用生物信息学技术进行分析并与基因库进行比对分析。结果:1)用PCR-RFLP技术对新疆331例HBV感染者的HBV基因型、基因亚型进行检测,随机选取部分标本用直接测序法验证。结果显示331例慢性HBV感染者的HBV基因型为:B基因型12.7%,C基因型64%,C/D重组体16%,D基因型7.3%。进一步检测基因亚型显示B基因亚型均为Ba亚型,未检测到Bj亚型。在C基因型中,C1亚型42.9%,C2亚型57.1%。不同民族基因型分析显示,在汉族HBV感染者中,B基因型14.9%,C基因型72.9%,C/D重组体9.5%,D基因型2.7%,而维吾尔族HBV感染者中B基因型8.3%,C基因型45.9%,C/D重组体29.4%,D基因型16.5%。维吾尔族与汉族比较,基因型分布有差别（P<0.05）。进一步基因亚型结果显示Ba亚型中,汉族78.6%,维吾尔族21.4%。C基因亚型汉族76.4%,其中,C1亚型39.5%,C2亚型60.5%;而维吾尔族23.6%,C1亚型54%,C2亚型46%。在不同临床类型中,慢性乙型肝炎中,C1亚型26.7%,C2亚型33.3%。在乙肝肝硬化中,C1亚型30%,C2亚型45.3%。在肝癌中,C1亚型30.8%;C2亚型46.2%。2)用PCR-RFLP技术检测HBV PC变异和BCP变异结果显示,PC变异30.2%,BCP变异34.4%。进一步比较PC变异和BCP变异,在不同亚型分布显示,Ba亚型中PC变异35.7%,BCP变异28.6%;C1亚型中PC变异37.4%,BCP变异41.8%;C2亚型PC变异25.6%,BCP变异31.4%;C/D重组体PC变异20.8%,BCP变异35.8%。C1亚型BCP变异明显高于Ba亚型,有统计学意义（P<0.05）,PC变异在各亚型中无明显差别（P>0.05）。维吾尔族HBV感染者中,Ba亚型PC变异1.8%,BCP变异5.5%;C1亚型PC变异3.7%,BCP变异11%;C2亚型PC变异5.5%,BCP变异7.3%;C/D重组体PC变异6.4%,BCP变异12.8%,C/D重组体的PC变异、BCP变异明显高于Ba亚型,差异有统计学意义（P<0.01）。C1亚型、C2亚型介于两者之间。3)使用PCR-RFLP技术对HBV PCR-测序方法,对14例病人进行全基因的测序。全基因测序证实2例C/D重组体,12例D基因型与RFLP方法保持一致。测序结果显示2例C/D重组体,12例D基因型与GenBank现有的序列有差异。全部在GenBank上收录。4)用PCR-测序方法,对新疆18例HBV感染者的HBV P基因区测序,采用生物信息学技术进行分析,在P基因区变异结果显示,14例服用阿德福韦治疗,CHB标本中有13例出现P基因区变异。进一步分析显示,主要在聚合酶B区附近的变异（16个）和D区（6个）附近。5例C1亚型在聚合酶B区附近的变异有9个;聚合酶D区附近的变异有1个。5例C2亚型在聚合酶B区附近的变异有3个;聚合酶D区附近的变异有3个。6例Ba亚型在聚合酶B区附近的变异有4个;聚合酶D区附近的变异有8个。1例D基因型在聚合酶B区附近的变异有3个;聚合酶D区附近的变异有1个。1例C/D1亚型在聚合酶B区附近的变异2个。34例YMDD变异中,B基因型11.8%,C基因型64.7%,C/D基因型20.6%例,D基因型2.9%,提示C基因型易出现YMDD耐药变异。在基因亚型中,10例C1亚型45.4%,12例C2亚型54.5%,YMDD变异在C2亚型比C1亚型的多。结论:1)新疆地区331例HBV感染者的HBV采用PCR-RFLP方法,部分标本测序验证,采用生物信息学技术进行分析,结果显示新疆HBV基因型以C基因型为主,且以C2亚型为主。汉族HBV基因型以C基因型为主,且以C2亚型为主;维吾尔族HBV基因型以C基因型、C/D重组体为多,且以C1基因亚型为多。汉族C2基因型明显高于维吾尔族,而维吾尔族C/D重组体、D基因型明显高于汉族。在新疆地区,HBV基因型中依次为C基因型>C/D重组体>B基因型>D基因型;汉族基因型依次为C基因型>B基因型>C/D重组体>D基因型;维吾尔族基因型依次为C基因型>C/D重组体>D基因型>B基因型。C基因亚型汉族中C2亚型>C1亚型,维吾尔族中C1亚型>C2亚型。在乙肝肝硬化、肝癌中,C2所占亚型比例明显高于慢性乙型肝炎C2亚型的比例,有统计学意义（P<0.05）,在肝癌中C2亚型明显高于C1亚型。2)对新疆331份HBV感染的血清进行HBV PC、BCP变异研究结果显示,C1亚型BCP变异明显高于Ba亚型,PC变异在各亚型中无明显差别。Ba亚型BCP变异发生率最低,C/D重组体PC变异发生率最低。说明HBV不同的亚型之间存在PC、BCP变异的差异。维吾尔族HBV感染者C/D重组体的PC变异、BCP变异明显高于Ba亚型,差异有统计学意义（P<0.01）。C1亚型、C2亚型介于两者之间。在慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化、肝癌中,HCC组的PC变异和BCP变异明显高于CH、LC组。3)对新疆14例HBV感染的HBV全序测序,在新疆首次经过以上方法,首次报道出一种新的基因型,命名为C/D重组体。维吾尔族中的C/D重组体所占比例高于汉族C/D重组体的比例。,说明C/D重组体存在族别的差异。已在GenBank上注册。4)对新疆18例P基因区变异位点进行分析。14例用阿德福韦治疗,13例出现变异,主要集中在聚合酶B区和D区附近。而且口服核苷类似物,随着时间的延长,出现HBV P基因变异的可能性增加;C1亚型变异主要集中在聚合酶B区附近,Ba亚型变异主要集中在聚合酶D区附近。YMDD变异的C2亚型比C1亚型的比例高,这方面的研究还需要更多实验证实。C1亚型变异主要集中在聚合酶B区附近,Ba亚型变异主要集中在聚合酶D区附近。
论文目录
相关论文文献
- [1].基于最小P值方法的罕见变异与数量性状的关联分析（英文）[J]. 黑龙江大学自然科学学报 2019(06)
- [2].变异[J]. 支部建设 2020(15)
- [3].突发公共卫生事件中信息变异的危害与成因分析[J]. 产业与科技论坛 2020(13)
- [4].高卉卉作品[J]. 美术教育研究 2017(16)
- [5].变异[J]. 黄河.黄土.黄种人 2020(06)
- [6].变异的鱼[J]. 美术界 2019(05)
- [7].基因评分可预知肥胖风险[J]. 百科知识 2019(16)
- [8].浅谈词语变异与语境[J]. 现代语文(语言研究版) 2010(09)
- [9].变异[J]. 益寿宝典 2017(33)
- [10].在“变异”与“突出”两视角下浅析英文诗歌[J]. 新智慧 2018(02)
- [11].病毒的变异[J]. 小星星(高年级版) 2015(04)
- [12].如何克服心理变异[J]. 人人健康 2014(13)
- [13].五成儿童口吃与基因变异有关[J]. 启蒙(0-3岁) 2010(05)
- [14].浅析责任书的变异及回归路径[J]. 政工学刊 2019(02)
- [15].乳腺良性肿瘤治疗中临床路径变异因素分析及措施[J]. 中国病案 2017(03)
- [16].阵发性室上性心动过速介入治疗临床路径变异因素的临床分析[J]. 西南军医 2016(01)
- [17].对变异的理解的研究综述[J]. 数学学习与研究 2013(15)
- [18].腹腔镜胆囊切除术治疗60例胆囊管变异的临床体会[J]. 家庭医药.就医选药 2017(10)
- [19].因为变异 所以深刻[J]. 语文教学与研究 2013(02)
- [20].《生物的变异》课堂合作学习教学回顾与总结[J]. 中学教学参考 2011(32)
- [21].科学家发现两种基因变异可能增加患肺癌几率[J]. 中华中医药学刊 2009(09)
- [22].民族社会:少数民族民间传说变异的主要机制[J]. 贵州民族研究 2018(05)
- [23].变异管理在医院外科临床路径持续改进中的作用[J]. 中国处方药 2016(02)
- [24].儿童激素耐药型肾病综合征基因变异及临床回顾性队列研究[J]. 临床儿科杂志 2020(10)
- [25].突发公共卫生事件信息变异研究[J]. 湖南大众传媒职业技术学院学报 2014(03)
- [26].系统变异管理对临床路径的影响[J]. 中国卫生质量管理 2014(03)
- [27].生物学变异数据在临床检验中的应用[J]. 国际检验医学杂志 2012(01)
- [28].临床路径变异因素和分类方法比较[J]. 中国病案 2012(11)
- [29].知识进化下知识变异的来源、条件与过程研究[J]. 情报杂志 2011(08)
- [30].论术语变异的原因与分析[J]. 术语标准化与信息技术 2010(03)