不同等级闭合性脑损伤大鼠HSP70的表达变化及意义

论文摘要

目的:探索HSP70蛋白及其mRNA在大鼠不同等级闭合性脑损伤中的表达;探索大鼠闭合性脑损伤分级自由落体打击技术;探讨HSP70在大鼠不同等级闭合性脑损伤中的意义。方法:1、根据自由落体原理,采用不同重量的砝码从同一高度下落,以不同冲击应力（128.90Kpa、386.70Kpa、644.50Kpa）的方法,造成轻、中、重度大鼠闭合性脑损伤模型共54只为实验组,颅脑假手术18只大鼠为对照组。2、应用免疫组织化学EliVision方法,检测不同等级大鼠闭合性脑损伤中HSP70蛋白的表达变化情况。3、采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）技术对不同等级大鼠闭合性脑损伤中HSP70mRNA进行定量分析。结果:1、HE染色结果显示伤后3h轻度损伤组软脑膜下皮质出血,神经胶质细胞增生,中度损伤组皮质浅层出血,脑实质水肿,神经胶质细胞增生,重度损伤组皮质广泛出血,出血灶周围见中性粒细胞浸润,神经元消失,周边脑实质网格样。2、免疫组织化学染色结果显示伤后3h HSP70蛋白在对照组、轻度损伤组、中度损伤组及重度损伤组均有不同程度的表达,其阳性表达率分别为8.1%、11.24%、20.56%、30.43%;轻度损伤组与对照组之间表达差异无统计学意义（P>0.05）;中度、重度损伤组与对照组表达差异有统计学意义（P<0.05）;轻、中、重度损伤组之间表达差异有统计学意义（P<0.05）。3、RT-PCR结果显示伤后3 h HSP70mRNA在对照组、轻度损伤组、中度损伤组及重度损伤组均有不同程度的表达,HSP70与β-actin的光密度比值平均值分别为0.330、0.415、0.550、0.767;轻度损伤组与对照组之间比值差异无统计学意义（P>0.05）;中度、重度损伤组与对照组比值差异有统计学意义（P<0.05）;轻、中、重度损伤组之间比值差异有统计学意义（P<0.05）。结论: 1、HSP70mRNA及蛋白在应激状态下的神经元损伤的表达是一致的,表明短时间内HSP70mRNA及其蛋白表达率可随着损伤程度的加重明显升高,HSP70的表达差异可作为短时间内中度以上闭合性脑损伤程度的一个较好的分级指标。2、该模型解决并完善了经典落体打击法中打击部位不稳定的问题,重复性好,对闭合性脑损伤实验研究有实用价值。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 第2章 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 动物选择及分组
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器设备
• 2.2 方法
• 2.2.1 大鼠脑损伤自由落体打击装置的设计
• 2.2.2 不同等级闭合性脑损伤模型的制作
• 2.2.3 冲击应力测定
• 2.2.4 取材
• 2.2.5 HE 染色法
• 2.2.6 Elivision 免疫组织化学法
• 2.2.7 RT-PCR 检测HSP70mRNA 的表达
• 2.3 统计学处理
• 第3章 结果
• 3.1 伤后3h 不同等级闭合性脑损伤范围的比较
• 3.1.1 大体观察
• 3.1.2 组织学观察
• 3.2 伤后3h HSP70 蛋白在不同等级闭合性脑损伤组织中的表达
• 3.3 伤后3h HSP70mRNA 在不同等级闭合性脑损伤组织中的表达
• 第4章 讨论
• 4.1 闭合性脑损伤实验研究的价值
• 4.2 闭合性脑损伤程度与HSP70表达的关系
• 第5章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 附带综述