毛细管电泳电化学发光检测生物活性物质

论文摘要

第一章,首先对毛细管电泳技术的发展及现状进行了简单的介绍,然后对毛细管电泳电化学发光技术的发展及应用进行了叙述,并且对毛细管电泳有关高通量单细胞分析技术（包括单细胞分析技术、高通量单细胞检测）方面的研究进行了概括。第二章,本实验采用毛细管电泳电化学发光的方法,对谷胱甘肽（GSH）、抗坏血酸（AA）和多巴胺（DA）进行了分离检测。为了获得GSH、AA和DA三种物质的最佳分离检测条件,考察了运行缓冲液种类、pH值、浓度、分离电压,检测电势及Ru（bpy）32+浓度的影响,确定了最佳分离检测条件为:pH 7.8,浓度为50 mmol·L-1的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液,分离电压为15 kV,Ru（bpy）32+的浓度为2.0×10-3 mol·L-1,检测电位为1.3 V,在12 kV下电迁移进样10 s。在优化条件下,三种物质的检测限（S/N）分别为:谷胱甘肽1.0×10-6mol·L-1,抗坏血酸1.0×10-6mol·L-1和多巴5.0×10-7 mol·L-1。采用1.0×10-5 mol·L-1DA、5.0×10-4 mol·L-1GSH和1.0×10-5 mol·L-1AA混合标准溶液连续进样6次,电化学发光峰高的相对标准偏差（RSD）分别为3.3%、2.2%和3.1%,迁移时间的相对标准偏差（RSD）分别为1.1%、0.98%和1.2%。并且对人血血红细胞溶膜液中的谷胱甘肽、抗坏血酸和多巴胺进行了分离,加标回收率分别为96%、105%和103%。第三章,采用毛细管电泳电化学发光检测的方法,对香草扁桃酸（VMA）和高香草酸（HVA）进行分离检测,实验中对于缓冲液种类、pH值及浓度大小、分离电压、检测电势、及Ru（bpy）32+的浓度进行了考察。我们确定了对两种物质的分离检测最优条件:pH8.2 50 mmolL-1的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液,检测电势1.2 V,分离电压为16 kV,Ru（bpy）32+的浓度为5 mmolL-1。在10 kV下电迁移进样10 s。在以上优化条件下,两种物质的检测限（S/N）分别为:VMA5.0×10-7 mol·L-1,HVA6.1×10-7 mol·L-1。将VMA(1.0×10-5 mol·L-1)和HVA(1.0×10-5 mol·L-1)混合标准溶液连续进样检测6次,得到电化学发光强度的相对标准偏差（RSD）分别为2.7%和3.1%,迁移时间的相对标准偏差（RSD）分别为1.1%和0.9%。并对尿样中VNA和HVA进行了检测,加标回收率分别为98%和99%。第四章,自制了高通量单细胞计数装置,采用压力控制细胞进样,实验操作简单计数过程快捷。采用pH 7.8浓度为20 mmol·L-1的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液作为流通介质,Ru（bpy）32+浓度为5.0×10-3 mol·L-1作为检测条件,检测电位为1.3 V,进样压力为0.6 MPa,对人血血红细胞采用电化学发光检测进行了计数,单细胞的计数间隔约为20 s,细胞计数的发光强度与显微镜下观察到的细胞流通情况相一致,并在高通量计数装置中加入了细胞溶膜装置,为高通量单细胞分析的打下了基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 毛细管电泳的基本理论
• 1.1.1 毛细管电泳的分离模式
• 1.1.2 毛细管电泳的进样技术
• 1.1.3 毛细管电泳的检测器
• 1.1.4 毛细管电泳的研究进展
• 1.2 毛细管电泳电化学发光检测技术
• 1.2.1 Ru（bpy）32+电化学发光的实际应用
• 1.2.2 毛细管电泳电化学发光检测
• 1.3 高通量单细胞分析技术
• 1.3.1 单细胞分析技术
• 1.3.2 高通量单细胞分析
• 1.4 毛细管电泳电化学发光检测前景展望
• 参考文献
• 第二章 毛细管电泳电化学发光检测谷胱甘肽、抗坏血酸和多巴胺
• 2.1 引言
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 实验仪器
• 2.2.2 材料与试剂
• 2.2.3 实验方法
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 缓冲溶液的选择
• 2.3.2 谷胱甘肽、抗坏血酸和多巴胺电化学发光行为的研究
• 2.3.3 谷胱甘肽、抗坏血酸和多巴胺分离条件的选择
• 2.3.4 线性范围、检测限和重现性
• 2.3.5 人血血红细胞溶膜液中三种物质的分离检测及回收率
• 2.4 结论
• 参考文献
• 第三章 毛细管电泳电化学发光检测香草扁桃酸和高香草酸
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 实验仪器
• 3.2.2 材料与试剂
• 3.2.3 实验方法
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 缓冲液种类的选择
• 3.3.2 香草扁桃酸和高香草酸电化学发光行为的研究
• 3.3.3 香草扁桃酸和高香草酸分离条件的选择
• 3.3.4 线性范围、检测限和重现性
• 3.3.5 样品测定和回收率
• 3.4 结论
• 参考文献
• 第四章 高通量单细胞进样计数装置的研制和应用
• 4.1 引言
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 实验仪器
• 4.2.2 材料与试剂
• 4.2.3 实验方法
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 高通量毛细管电化学发光检测单细胞计数
• 4.3.2 高通量进样计数装置的应用
• 4.4 结论
• 参考文献
• 结论
• 符号与缩写
• 致谢
• 攻读学位期间已发表的和待发表的相关学术论文题录