HRP-3在肝癌组织中上调表达的生物学意义探讨

论文题目: HRP-3在肝癌组织中上调表达的生物学意义探讨

论文类型: 博士论文

论文专业: 遗传学

作者: 孔亚慧

导师: 赵寿元

关键词: 肝癌,血管形成,细胞增殖,信号通路,反应元件

文献来源: 复旦大学

发表年度: 2005

论文摘要: 本文以我室已获得发明专利授权的HRP3(Hepatoma-derived growth factor related protein 3)基因为研究对象，对其功能进行了初步的研究。HRP3是HDGF(Hepatoma-derived growth factor)家族成员之一，它在正常情况下仅主要表达于人的睾丸，脑和心脏，其他组织中虽然也有表达，但表达很少。然而，我们发现，它在肝癌组织或肝癌细胞株中高丰度表达。为了探讨其在肝癌中高丰度表达的生理或病理学意义，我们用免疫组化方法证实它确在肝癌细胞中上调表达，且在肝癌组织内的血管或血管区的丰度最高。同时，我们用在哺乳动物中瞬时表达以及细菌中原核表达的方法检测了HRP-3是否能像HDGF那样可以分泌到细胞外，结果用HA或GST单克隆抗体在浓缩的培养基上清液中检测到了HA-HRP-3或GST-HRP-3融合蛋白，证明它确实能被分泌或释放到细胞外的培养基中。此外，EGFP-HRP-3的融合蛋白亚细胞定位分析结果又显示HRP-3能定位在核中，这些结果提示HRP-3具有分泌蛋白和核定位蛋白的双重特性。 为了探讨HRP-3作为分泌蛋白的功能，我们用原核表达的HRP-3蛋白作为普通培养基的添加物质，分别培养成纤维细胞NIH3T3，人脐静脉内皮细胞HUVEC和肝癌细胞HepG2，其结果显示HRP-3蛋白在50-1000ng／mL浓度具有促生长因子的活性，尤其对于HUVEC细胞的促增殖作用最强，其次是NIH3T3细胞，对肝癌细胞也有明显的促增殖作用。这一结果提示HRP-3在肝癌组织中表达丰度显著上调，在病理学上具有促进瘤体内血管生长和肝癌细胞增殖的意义。 基于上述发现，我们又进一步探讨了HRP-3促细胞生长的分子机制，结果显示当用50-1000ng／mL浓度的HRP-3重组蛋白作用于NIH3T3细胞，作用5-10min，可以使MAPK通路的MEK和ERK1／2蛋白激酶的磷酸化增强，而这种激活作用又能被MEK通路的特异抑制剂PD98059抑制，但对由P38和JNK激酶介导的通路则不受影响。为检查对MAPK通路的这种激活过程是否具有生理效应，我们又用双荧光素酶报告反应系统分别检查了MAPK通路下游的应答状态，结果显示，在外源重组蛋白HRP-3加入后的1-4h，SRE和E-box(C-Myc)元件下游的荧光素酶蛋白的表达增强，从而在分子水平说明HRP-3基因在肝癌中的上调表达所产生的促肿瘤生长作用，是通过细胞内和组织间隙HRP-3蛋白的增加，以增强血管内皮细胞和肝癌细胞内的MAPK信号来实现的。同时，我们还发现稳定表达外源HRP-3的细胞株显示出增殖或生长速度的加快，但其分子机制除了增加培养液中的HRP-3蛋白的分泌量之外，HRP-3是否还存在细胞核内发挥促增殖调节作用，还有待于进一步研究。 此外，本文还进行了另一项小的研究工作，即从人脑cDNA文库克隆了一个新的含CRAL-TRIO结构域的成员，细胞内视黄醛结合蛋白类似蛋白(Cellular retinaldehyde binding protein-like，CRALBPL)基因。它定位在染色体8q12.2，包含1694个碱基，开放阅读框编码354个氨基酸，CRAL-TRIO结构域位于118-279位氨基酸。在人18种组织cDNA的RT-PCR分析显示CRALBPL主要在脑中表达。CRAL-TRIO结构域的比对分析显示CRALBPL与CRALBP有45％的相似性。通过Western分析表明CRALBPL的分子量约为40kD，EGFP-CRALBPL融合蛋白在转染的Hela细胞中定位于细胞质。由于CRALBP是在脊椎动物的视觉过程中作为一个下游的蛋白发挥作用，它作为内源性配体携带11-顺式视黄醇和11-顺式视黄醛，可能是视觉周期的一个功能组分。CRALBPL作为CRALBP的同源基因，其克隆和鉴定为视觉生理研究提供了一种新的候选分子材料。

发布时间: 2007-06-28

参考文献

• [1].C-reactive protein相互作用蛋白的筛选及其影响肝癌细胞迁移侵袭机制的研究[D]. 佘莎.重庆医科大学2018
• [2].Rab5a通过上调Cdc42影响肝癌细胞迁移和侵袭[D]. 杨晓.重庆医科大学2018
• [3].TMPRSS4协同CLDN1调控肝癌增殖和侵袭转移机制研究[D]. 沙娅·玛哈提.新疆医科大学2018
• [4].基于整合数据的肝癌基因突变分析[D]. 邹洋.华东师范大学2018
• [5].miR-340靶向DcR3基因抑制肝癌发生发展的机制探讨[D]. 谢丽娟.吉林大学2018
• [6].ANXA5通过ERK/RAC1调控肝癌/肾透明细胞癌进展及转移的研究[D]. 孙旭娟.大连医科大学2018
• [7].Wnt通路基因多态性与广西肝癌发生发展的关联性研究[D]. 魏斐斐.广西医科大学2018
• [8].miR-152-5p对肝癌细胞的增殖和凋亡的影响及相关机制的研究[D]. 常洞镭.山东大学2018
• [9].UBAP2L对肝癌生长和转移的影响及其潜在分子机制研究[D]. 王伟.山东大学2018
• [10].BCA3在肝细胞癌中的表达、生物学功能及分子机制研究[D]. 马冬.郑州大学2018

相关论文

• [1].正常人肝组织及肝癌转移相关核心岩藻糖基化蛋白质组学研究[D]. 代智.复旦大学2006
• [2].高转移潜能人肝癌细胞表面分子特异性结合肽的筛选及其生物学功能[D]. 荚卫东.复旦大学2006
• [3].焦点粘附激酶在肝癌中表达及其对人肝癌细胞MHCC97-H作用的研究[D]. 袁周.复旦大学2006
• [4].与肝细胞肝癌相关的两个基因KIAA0101，DLK1的功能研究[D]. 郭鸣雷.复旦大学2006
• [5].新基因BNIPL在肝癌生长和转移中的作用[D]. 谢丽.复旦大学2006
• [6].用基因芯片技术寻找新的肝癌早期诊断标记物的研究[D]. 贾户亮.复旦大学2006
• [7].肝癌转移相关的蛋白质组学研究[D]. 申华莉.复旦大学2006
• [8].关于PTEN和profilin 1影响人肝癌细胞增殖和迁移的分子机制研究[D]. 张文.复旦大学2006
• [9].肝癌转移相关转录因子的研究及其意义[D]. 潘奇.复旦大学2006
• [10].缺氧诱导因子2α对肝癌细胞生物学行为的影响[D]. 王健.华中科技大学2006

标签：肝癌论文;  血管形成论文;  细胞增殖论文;  信号通路论文;  反应元件论文;