论文摘要
研究目的本实验的目的是研究c-Maf在关节软骨中是如何受到调控,明确关节软骨分化过程中起关键作用的转录因子和分子机制,确定c-Maf在骨关节炎的发生发展中所起的作用,并通过干预c-Maf的信号传导级联反应开发骨关节炎新的分子诊断手段和分子治疗药物。研究方法新鲜软骨组织取自接受膝关节表面置换手术的OA患者（n=10）和因车祸行下肢截肢手术的患者（n=10）。按照Outerbridge分级,将软骨组织按区域划分为二组:Outerbridge 1级（OAI组）和正常对照组（Outerbridge 0级）（NC组）。采用real-timeRT-PCR技术研究c-maf在正常和OA软骨细胞之间的表达差异。随后,采用RNA干扰技术对c-maf在骨关节炎软骨细胞中的基因表达进行敲降,探讨c-maf表达下调对软骨细胞表型的标志基因ALP、Collagen X、mmp-13的调控作用。采用染色质免疫沉淀方法检测c-maf是否结合在mmp-13的启动子区。研究结果Real-time RT-PCR结果证实c-maf在骨关节炎软骨中的表达上调。C-maf主要分布在OA软骨中的浅表层,并在增生的软骨簇中表达尤为高。C-maf基因mRNA被有效敲降后,ALP、Collagen X、mmp-13的mRNA和蛋白的水平下降,有明显的统计学差异,染色质免疫沉淀结果显示,c-maf结合在mmp-13的启动子区,其结合区包含AP-1位点。结论一、c-maf在骨关节炎软骨表达升高,可能参与了骨关节炎的发生与发展二、mmp-13是软骨细胞肥大分化的一个标记基因,同时也在骨关节炎发展过程中扮演了重要角色。C-maf结合在mmp-13的启动子区,转录调控mmp-13的表达,C-maf可能是一个潜在的治疗骨关节炎的目标基因。。三、在骨关节炎软骨细胞中,c-maf被有效敲降后,ALP、Collagen X的表达水平也相应下降,c-maf参与了软骨细胞的肥大与终末分化过程,为骨关节炎病因的探讨提供了新的见解。
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