竹叶黄酮萃取与树脂纯化的工艺研究及抗氧化活性的评价

论文摘要

竹叶黄酮具有明显的抗脂质过氧化、清除羟自由基和调节血脂功能及抗过敏、抗炎、抗菌、抗突变、抗肿瘤、抗溃疡、抗病毒、保护心血管疾病及保肝等生理活性,目前已受到国内外市场的广泛关注。本文旨在建立提高竹叶黄酮纯度的方法,并评价不同纯度竹叶黄酮的抗氧化能力。首先,优化并比较了混合溶剂萃取法和双水相萃取法分离竹叶黄酮的工艺条件,混合溶剂萃取法分离的最优条件为：（正丁醇/乙酸乙酯（9.1：1））/原液/乙酸=3.1：1：0.1,萃取温度为70℃,萃取时间为15min,此条件下得到的竹叶黄酮纯度可以达到36.9%,萃取率达到91.3%。比已有的萃取条件获得的竹叶黄酮纯度高大约6%。双水相萃取法分离的最优条件为：最佳双水相体系是31%PEG 400和11%（NH4）2SO4,pH值为3.9,NaCl质量分数0.7%,原液质量分数为51.5%,萃取温度为20℃,此条件下得到的竹叶黄酮萃取率为97.8%。对比两种提取方法的优缺点,考虑到工业化生产及经济效益问题,改进后的混合溶剂萃取法较于双水相萃取法更合适。其次,以混合溶剂萃取得到的产品为样品,采用大孔吸附树脂进行进一步纯化。从10种大孔吸附树脂中筛选出H103树脂作为最佳实验树脂,最佳上样浓度为16mg·mL-1,最佳吸附流速为1mL·min-1。洗脱时先以水洗至无色,然后以1BV的20%乙醇溶液洗,最后以90%的乙醇溶液洗脱,洗脱速度为1mL·min-1。此条件下竹叶黄酮的纯度达到77.7%,转移率达到92.5%。最后,评价了两种纯度竹叶黄酮的抗氧化能力,其清除超氧负离子自由基和DPPH自由基的能力都比茶多酚强,低纯度竹叶黄酮的EC50相应为11.7μg·mL-1和18.3μg·mL-1,分别是Vc的约1.2倍和3.4倍,高纯度的竹叶黄酮的EC50相应为10.4μg·mL-1和15.1μg·mL-l,分别是Vc的约1.1倍和2.8倍；其清除羟自由基效果与茶多酚相当,低纯度竹叶黄酮的EC50为0.58mg·mL-1,高纯度竹叶黄酮的EC50为0.54mg·mL-1,比Vc效果好。纯度较高的竹叶黄酮抗氧化能力较强。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述与课题研究内容
• 1.1 竹类资源简介
• 1.2 黄酮类化合物简介
• 1.2.1 概述
• 1.2.2 黄酮类化合物的基本骨架
• 1.2.3 黄酮类化合物的分类
• 1.2.4 黄酮类化合物的物理性质及显色反应
• 1.2.5 黄酮类化合物的药理活性
• 1.3 竹叶黄酮的研究现状
• 1.4 竹叶黄酮的药理活性
• 1.4.1 抗氧化作用
• 1.4.2 降血脂和降血清胆固醇
• 1.4.3 抗脂质过氧化
• 1.4.4 阻断亚硝化反应
• 1.4.5 抗衰老、抗疲劳
• 1.4.6 抗肿瘤作用
• 1.4.7 其他作用
• 1.5 竹叶黄酮提取及纯化的研究现状
• 1.5.1 竹叶黄酮提取的研究现状
• 1.5.2 竹叶黄酮纯化的研究现状
• 1.6 研究目的与意义
• 1.7 主要研究内容
• 第二章 混合溶剂萃取法分离竹叶黄酮的工艺研究
• 前言
• 2.1 实验材料与仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 分光光度法测定竹叶黄酮
• 2.2.2 提取工艺流程
• 2.2.3 试验设计
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 吸光度法测定牡荆素标准曲线
• 2.3.2 混合溶剂萃取体系的确定
• 2.3.3 单因素实验
• 2.3.4 曲面响应法对混合溶剂萃取法提取竹叶黄酮工艺的优化
• 2.4 本章小结
• 第三章 大孔吸附树脂纯化竹叶黄酮的工艺研究
• 前言
• 3.1 实验材料与仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 分光光度法测定竹叶黄酮
• 3.2.2 HPLC法测定竹叶黄酮
• 3.2.3 大孔吸附树脂的筛选
• 3.2.4 乙醇浓度对树脂洗脱性能的影响
• 3.2.5 动态吸附与洗脱实验
• 3.2.6 数据处理
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 HPLC法测定牡荆素标准曲线
• 3.3.2 大孔吸附树脂的筛选
• 3.3.3 吸附等温实验
• 3.3.4 静态吸附动力学实验
• 3.3.5 洗脱条件的确定
• 3.3.6 动态吸附与洗脱实验
• 3.4 本章小结
• 第四章 竹叶黄酮的抗氧化活性研究
• 前言
• 4.1 实验材料与仪器
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 竹叶黄酮抗氧化活性实验
• 4.2.1.1 清除DPPH自由基能力的测定
• 2^-·）的清除作用'>4.2.1.2 对超氧负离子（O₂^-·）的清除作用
• 4.2.1.3 对羟自由基（·OH）的清除作用
• 4.3 竹叶黄酮抗氧化性结果与讨论
• 4.3.1 竹叶黄酮对DPPH自由基清除效果
• 2^-·）清除效果'>4.3.2 竹叶黄酮对超氧阴离子自由基（O₂^-·）清除效果
• 4.3.3 竹叶黄酮对羟自由基（·OH）清除效果
• 4.4 本章小结
• 第五章 双水相萃取法分离竹叶黄酮的工艺研究
• 前言
• 5.1 实验材料与仪器
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 分光光度法测定竹叶黄酮
• 4）₂SO₄双水相体系相图的绘制'>5.2.2 PEG/（NH₄）₂SO₄双水相体系相图的绘制
• 5.2.3 双水相体系的配制
• 5.3 结果与讨论
• 4）₂SO₄双水相体系相图'>5.3.1 PEG/（NH₄）₂SO₄双水相体系相图
• 4）₂SO₄双水相体系的确定'>5.3.2 PEG/（NH₄）₂SO₄双水相体系的确定
• 5.3.3 影响竹叶黄酮萃取的因素
• 5.3.4 曲面响应法对双水相萃取法提取竹叶黄酮工艺的优化
• 5.3.5 双水相萃取法与混合溶剂萃取法对竹叶黄酮提取效果的优缺点
• 5.4 本章小结
• 全文总结和展望
• 参考文献
• 硕士期间发表的论文
• 致谢