四川部分地区鸡马立克病毒分子流行病学调查

论文摘要

马立克病是鸡常见的一种淋巴细胞增生性疾病,主要引起各种组织和内脏器官的肿瘤,在养殖业中具有重要经济意义的一种病毒性疾病,病原由α疱疹病毒亚科马立克病毒属的马立克病毒所引起。疫苗的应用为该病的控制和预防起到重要作用,但随着马立克野毒毒力的不断增强,而不断获得突破现有疫苗免疫的能力。目前,马立克病对养禽业来说始终是一种威胁,因此分离分离鉴定分析目前流行的马立克野毒株毒力和特征对于监控野毒的变异和评价现有疫苗的免疫效果显得十分重要。从2008年到2010年,我们应用PCR方法从中国四川省部分地区的23个鸡场中563份血液中共检测到145份阳性样本,马立克病毒在鸡群中的平均感染率为25.7%,其中,在HVT免疫肉鸡群中MDV野毒感染率为20%-60%左右,在HVT免疫种鸡群中MDV野毒感染率为12.5%～42.5%左右,在CVI988免疫种鸡群中MDV野毒感染率几乎为零。从23个不同的鸡场中,我们共分离到了18株MDV野毒,PCR成功克隆并测序了18株野毒的致瘤性相关性基因Meq、pp38和vIL-8,应用DNAstar软件同GenBank上获得的其他参考序列进行核苷酸和氨基酸序列的同源性分析显示,核苷酸的同源性分别为97.7～99.6%、99.4-100%和99.0-99.5%,氨基酸的同源性分别为95.0-98.8%、99.3-100%和97.0-98.5%。此外,不同国家地区不同毒株的致瘤相关基因的比对分析发现,Meq中的4个氨基酸突变（第80、115、139、176位）和vIL-8中2个氨基酸的突变（第4、31位）在四川部分地区流行的MDV野毒中具有规律性的特征,可做为四川部分地区流行MDV野毒的分子特征之一。另外,基于Meq和vIL-8氨基酸序列构建的遗传进化树分析显示,四川分离的MDV野毒同中国其他地区分离的野毒在进化树中形成一个独立的分支。病毒的致病性和疫苗的免疫保护性试验显示四川部分地区分离的MDV野毒均属于强毒株,应用CVI988疫苗能给鸡群提供良好的免疫力。总之,本研究同GenBank上发表的其他参考序列比对分析揭示了中国四川部分地区流行毒株的致瘤相关基因Meq、pp38和vIL-8的主要分子特征,这三个基因中,某些位点碱基的突变,丢失和插入可作为四川部分地区流行MDV野毒的分子标记。本论文为MDV在四川部分地区流行的分子特征和该病的预防控制提供了宝贵的资料和数据。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩略表
• 目录
• 第一章 文献综述及选题的目的意义
• 1 前言
• 2 病原学
• 2.1 分类与形态学特征
• 2.2 病毒基因和蛋白
• 3 流行病学与发病机理
• 3.1 易感宿主
• 3.2 发病日龄
• 3.3 致病机理
• 3.4 免疫抑制现象
• 4 临床症状和病理变化
• 4.1 神经型
• 4.2 内脏型
• 4.3 眼型
• 4.4 皮肤型
• 5 诊断技术
• 5.1 病毒分离
• 5.2 病毒抗原的检测
• 5.3 聚合酶链反应技术（PCR）
• 5.4 DNA探针技术
• 5.5 电子显微镜
• 5.6 抗体检测
• 6 疾病防控
• 6.1 疫苗接种
• 6.2 抗病育种
• 6.3 生物安全措施
• 7 本试验研究的目的及意义
• 第二章 试验研究
• 1 试验材料
• 1.1 鸭胚、鸡胚和雏鸡
• 1.2 宿主菌及载体
• 1.3 主要仪器
• 1.4 主要试剂
• 1.5 试剂配制
• 1.6 引物设计
• 2 试验方法
• 2.1 样本采集
• 2.2 阳性样品的筛选
• 2.3 病毒分离
• 2.4 纯化病毒的PCR鉴定
• 2.5 致瘤相关基因的克隆
• 2.6 致瘤相关基因的序列分析
• 2.7 病毒蚀斑形成单位的测定
• 2.8 病毒的致病性试验
• 2.9 人工感染鸡群的病理组织学诊断
• 3 结果
• 3.1 采集样本的PCR检测结果
• 3.2 病毒分离与纯化
• 3.3 分离病毒的PCR检测
• 3.4 致瘤基因克隆
• 3.5 致瘤基因核酸和氨基酸比对结果
• 3.6 致瘤基因的变异性分析
• 3.7 致瘤基因的遗传进化分析
• 3.8 病毒致病性以及免疫保护试验
• 3.9 病理组织学诊断
• 4 讨论
• 4.1 致瘤相关基因的序列分析
• 4.2 遗传进化树分析
• 4.3 病毒致病性和疫苗保护性试验分析
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介以及攻读硕士学位期间发表的学术论文
• 附录