高压氧对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用及机制研究

论文摘要

目的:利用新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage, HIBD）动物模型,观察HIBD以及高压氧（hyperbaric oxygen, HBO）干预后新生大鼠不同时间点脑组织大体及其细胞形态变化、生长相关蛋白（growth-associated protein-43,GAP-43）及神经生长抑制因子Nogo-A的合成情况,从而探讨HBO干预对新生大鼠HIBD的保护作用及机制,为高压氧治疗新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxic ischemic encephalopathy, HIE）提供新的理论依据。方法:7日龄Wistar大鼠144只,雌雄不限,体重1218g,随机分为3组:对照组（CON组）,HIBD组和HBO组,各48只,后两组制成模型后根据处死动物的时间不同随机分为缺血缺氧后1、4、7、10、14、21d天6个亚组,每组8只,CON组不做任何处理,也在相应的时间点分为6个亚组,每组8只。模型采用阻断右侧颈总动脉后置于含8%O2的低氧环境中2h制备而成。HBO组于缺血缺氧1h后行HBO处理:压力为2.0ATA、60min/次、1次/d,1、4d亚组连续治疗至动物处死,其余亚组连续治疗7d。各组大鼠于相应时间点断头取脑后肉眼观察右侧脑组织大体,光镜下观察各组右侧脑组织HE染色的病理改变,免疫组织化学方法检测三组大鼠不同时间点右侧大脑皮层GAP-43和Nogo-A的表达。结果:⑴缺血缺氧后新生大鼠出现不同程度的行为异常。⑵缺血缺氧后肉眼可见脑组织大体有不同程度的异常改变,HBO治疗后上述改变减轻。⑶HE染色:CON组脑组织细胞层次清楚、形态正常,无神经细胞缺失;HIBD组术后1d可见右侧大脑皮层细胞肿胀明显,出现变性、坏死;术后4d坏死明显;术后7d神经元数量明显减少,胶质细胞增生、排列紊乱。术后14d、21d神经元大量丢失,胶质细胞增生明显。HBO组各时间点病理变化较HIBD组轻,细胞排列尚规则。⑷GAP-43的表达:GAP-43阳性染色呈棕黄色的细颗粒沉积,阳性细胞广泛表达于大脑皮层和海马,阳性着色主要位于神经元胞体和突起,三组GAP-43阳性产物表达高峰均在术后第10d对应的时间,同组不同时间点阳性细胞平均灰度值比较差异有统计学意义（P﹤0.05）。HIBD组各时间点GAP-43免疫阳性颗粒染色较CON组深,数量多,阳性细胞平均灰度值较CON组低,差异均有统计学意义（P﹤0.01）;HBO组各时间点GAP-43免疫阳性颗粒染色较HIBD组深,数量多,阳性细胞平均灰度值较HIBD组低,差异均有统计学意义（P﹤0.05）;⑸Nogo-A表达:Nogo-A阳性染色呈棕黄色的细颗粒沉积,广泛分布于大脑皮层,阳性着色主要位于少突胶质细胞,随日龄增加染色逐渐加深,同组不同时间点阳性细胞平均灰度值比较差异有统计学意义（P﹤0.05）。HIBD组各时间点Nogo-A免疫阳性颗粒最多,染色最深,各时间点阳性细胞平均灰度值均较CON组和HBO组低,差异均有统计学意义（P﹤0.05）。结论:1、从病理学和大体上证实HBO治疗可减轻缺氧缺血所致的脑损伤。2、新生大鼠HIBD后皮层GAP-43表达较CON组增加,提示HIBD后中枢神经系统存在一定的自身重塑修复能力,HBO治疗可以使HIBD后GAP-43的表达增加,并维持一较长时间。3、新生大鼠HIBD后皮层Nogo-A在一较长时间有高表达（121d）,提示其与脑缺氧缺血后神经再生障碍有关,HBO治疗可以通过降低Nogo-A的表达来促进HIBD后的神经再生。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词表
• 正文
• 前言
• 实验材料和方法
• 实验结果与讨论
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 正文
• 参考文献
• 个人简介
• 致谢