激素调控拟南芥离体苗再生的研究

论文摘要

离体器官的再生受到多种内外因素的影响,但是目前还没有工作对这些因素进行系统的研究。本文首先以拟南芥的根为外植体,建立了一步法拟南芥苗离体再生体系。该体系简单易操作,实验周期短,离体苗再生频率高、同步性好,为进一步的研究提供了良好平台。在此基础上,我们从外植体遗传背景、组织来源、激素种类、浓度等方面系统地分析了影响拟南芥苗再生的因素。结果如下:1.不同种类的生长素对于愈伤组织的形成影响较大。NAA与2,4-D比IAA更易诱导愈伤组织的形成。2.不同种类的激素在一定浓度范围内促进离体苗再生。细胞分裂素6-BA能够分化苗的上限浓度比ZT低,即细胞分裂素ZT在一定浓度范围内诱导苗再生;生长素IAA,NAA,2,4-D同样在一定浓度范围内诱导苗再生,浓度范围分别在10.0-20.0μM,1.0-10.0μM,0.1μM左右。因此激素的种类其浓度范围对分化苗起重要作用。3.不同生态型之间离体苗的再生频率变化较大。Ws生态型比Col生态型分化频率高,分化时间短,且再生苗发育正常。4.根的不同组织来源（分生区和伸长区、根毛区）对于拟南芥离体苗的再生影响较小,平均每块愈伤组织分化苗的数目随着细胞分裂素的升高略有降低。5.离体苗的再生需要特定的基本培养基。在同样激素条件下,MS培养基不能诱导正常的愈伤组织以及苗的再生,而B5培养基则能够高效诱导苗的再生。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 引言
• 1.1 植物器官离体再生的历史进程
• 1.1.1 花芽的离体再生
• 1.1.2 根和芽的离体再生
• 1.1.3 花器官的离体再生
• 1.1.4 果实的离体再生
• 1.2 外植体对离体器官再生的影响
• 1.2.1 外植体大小对离体器官再生的影响
• 1.2.2 外植体极性对离体器官再生的影响
• 1.2.3 外植体分化时期对离体器官再生的影响
• 1.2.4 外植体遗传背景对离体器官再生的影响
• 1.3 激素调控植物生长发育
• 1.3.1 生长素对植物生长发育的作用
• 1.3.2 细胞分裂素对植物生长发育的作用
• 1.4 激素在离体器官再生过程的作用
• 1.4.1 激素的吸收和代谢
• 1.4.2 内外源激素的互作
• 1.4.3 生长素与细胞分裂素的互作
• 1.4.4 激素分布对器官再生的影响
• 1.4.5 激素信号转导决定细胞命运
• 1.4.6 激素调控器官特征基因表达
• 1.5 本课题研究的目的意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料与试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 拟南芥幼苗培养
• 2.2.2 拟南芥植株种植
• 2.2.3 外植体的获得与培养
• 2.2.4 培养基
• 2.2.5 外源激素浓度设计
• 2.2.6 GUS 染色分析
• 2.2.7 愈伤组织的观察及记录
• 2.2.8 结果统计
• 3 结果
• 3.1 一步法离体苗再生体系的构建
• 3.2 离体器官再生的影响因素
• 3.2.1 外植体的遗传背景
• 3.2.2 外植体的组织来源
• 3.2.3 基本培养基的种类
• 3.2.4 生长素对器官离体再生的影响
• 3.2.4.1 生长素的浓度
• 3.2.4.2 生长素的种类
• 3.2.5 细胞分裂素对离体器官再生的影响
• 4 讨论
• 4.1 离体苗再生体系的对比
• 4.2 外植体的遗传背景影响离体苗再生
• 4.3 外植体的组织来源影响离体苗再生
• 4.4 基本培养基影响苗离体再生
• 4.5 激素影响离体苗的再生
• 5 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢