论文摘要
流行性感冒（influenza,简称流感）是由流行性感冒病毒引起的急性呼吸道传染病,不仅给人类健康与安全造成巨大的危害,还给人类经济发展与财产带来巨大的损失。目前抗流感病毒药物有离子通道阻断剂（主要包括金刚烷胺和金刚乙胺）、神经氨酸酶抑制剂（主要包括扎那米韦和奥司他韦）等,但这些药都存在一定的缺陷,而中药依托中医辨证论治、因人而异等诊疗思想,在流感防治中显示了得天独厚的优越性。毒热平注射液是由黄芩、栀子、猪胆粉、灯盏花等四味药组成的中药复方制剂,四药共奏清热燥湿、凉血解毒、活血通络之功。本实验采用流感病毒亚甲型鼠肺适应株（FM1）作为感染源,研究毒热平注射液对FM1感染小鼠巨噬细胞离体培养株的功能影响,以及FM1感染小鼠巨噬细胞免疫功能影响并探讨其作用机制,为毒热平注射液的临床应用提供理论依据。本实验研究共分为体内、体外两个部分:第一部分为体外实验:研究毒热平注射液体外对FM1感染小鼠巨噬细胞Ana-1功能影响。实验共分六组,正常细胞对照组、病毒对照组、毒热平注射液组（60μg/ml、30μg/ml、1μg/ml）、双黄连组（SHL）探讨毒热平注射液对流感病毒感染小鼠巨噬细胞Ana-1细胞培养上清中NO产生,以及对细胞因子TNF-α、IL-8以及细胞粘附分子ICAM-1产生的影响。第二部分为体内实验:研究毒热平注射液体内对FM1感染小鼠肺脏巨噬细胞功能的影响。以ICR小鼠（SPF级）作为研究对象。实验共分七组:毒热平注射液大、中、小剂量组,双黄连对照组,利巴韦林对照组,FM1感染模型组,正常组。上述各组小鼠感染FM1后,当天注射给药,1次/天,7天后摘取肺组织,观察肺部病理变化,计算肺指数,用ELISA法测定肺组织中TNF-α、IL-8、ICAM-1的含量,用Rt-PCR法测定肺组织中TNF-α、IL-8、ICAM-1 mRNA基因表达水平。第一部分体外实验结果:1毒热平注射液体外对FM1感染小鼠巨噬细胞Ana-1培养上清中NO含量的影响:实验结果发现,毒热平治疗组均可降低细胞上清中的NO的生成,与模型组比较,差异显著,（P < 0.05）,毒热平治疗组中60μg/ml组含量最低效果,与双黄连组相当,具有一定的量效关系,同时具有明显的时效关系,时间越长,作用越明显。2毒热平注射液对FM1感染的小鼠巨噬细胞Ana-1细胞上清中TNF-α含量的影响:实验结果发现,毒热平治疗组均可降低细胞上清中的TNF-α含量,与模型组比较,差异显著,P < 0.05,其中,毒热平治疗组中60μg/ml组TNF-α含量最低, P < 0.001,有一定的量效关系,浓度越大,作用越明显,并且具有明显的时效关系,时间越长,作用越明显。3毒热平注射液体外对FM1感染的小鼠巨噬细胞Ana-1培养上清中IL-8含量的影响:实验结果发现,毒热平治疗组均可降低细胞上清中的IL-8含量,与模型组比较,差异显著,P < 0.05,毒热平60μg/ml组中生成的IL-8最少,有明显的量效关系,同时,具有一定的时效关系,随着时间的延长,作用明显。4毒热平注射液对FM1感染的小鼠巨噬细胞Ana-1细胞上清中ICAM-1含量的影响:实验结果发现,毒热平治疗组均可降低细胞上清中的ICAM-1含量,与模型组比较,差异显著,P < 0.05,毒热平治疗组中60μg/ml组生成的ICAM-1最少,中剂量组次之,小剂量组效果最弱,同时,时间越长,效果越明显。第二部分体内实验结果:1毒热平注射液对FM1感染小鼠肺指数的影响:实验结果发现,模型组的肺指数显著高于正常组（P < 0.0001）,利巴韦林组（Rib组）、阳性药双黄连对照组（SHL）、毒热平大剂量组（DRPd）、毒热平中剂量组（DRPz）、毒热平小剂量组（DRPx）组与模型组比较,肺指数均明显降低（P﹤0.05 0.01）,其中以DRPz组最好。2毒热平注射液对FM1感染小鼠肺组织中TNF-α、IL-8、ICAM-1含量的影响:实验结果发现,与模型组相比,毒热平注射液大、中、小剂量组小鼠的肺组织匀浆中TNF-α、IL-8、ICAM-1的含量低于模型组,差异显著,P < 0.01;综合来看,毒热平大剂量组对肺组织匀浆中TNF-α、IL-8、ICAM-1的含量抑制作用最好,量效关系明显。3毒热平注射液对FM1感染小鼠肺组织中TNF-α、IL-8、ICAM-1 mRNA转录水平的影响:实验结果发现,与模型组相比,毒热平注射液大、中、小剂量组小鼠的肺组织匀浆中TNF-α、IL-8、ICAM-1的表达均低于模型对照组,差异显著,P < 0.05;从TNF-α、IL-8、ICAM-1 mRNA转录水平上来看,毒热平大剂量组对TNF-α、IL-8、ICAM-1抑制作用最好,有明显的量效关系。
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